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定點突變技術:從單點突變到多點突變2014/5/12
體外定點突變技術是研究蛋白質結構和功能之間的復雜關系的有力工具,也是我們在實驗室中改造/優化基因常用的手段。蛋白質的結構決定其功能,二者之間的關系是蛋白質組研究的重點之一。對某個已知基因的特定堿基進行...
士鋒生物甲醛滴定法測定氨基酸含量2014/5/8
二、原理水溶液中的氨基酸為兼性離子,因而不能直接用堿滴定氨基酸的羧基。甲醛可與氨基酸上的—N+H3結合,形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2等羥甲基衍生物,使N+H3上的H+游離出來,這樣就...
士鋒RNA的電泳,轉膜和雜交2014/5/7
實驗原理:基本同SouthernBlotting,但因RNA是單鏈分子,必須消除局部區域形成的二級結構,在電場中泳動的距離才能反映它本身的大小,因而需使用變性膠進行電泳;操作過程中應特別注意防止RNA...
士鋒生物不同分子量蛋白質的分離——凝膠柱層析法2014/5/4
凝膠層析又稱凝膠過濾,是一種按分子量大小分離物質的層析方法。該方法是把樣品加到充滿著凝膠顆粒的層析柱中,然后用緩沖液洗脫。大分子不能進入凝膠顆粒中的靜止相中,只留在凝膠顆粒之間的流動相中,因此以較快的...
士鋒生物模擬過氧化物酶的制備、固定與應用2014/4/28
過氧化物酶的輔基是血紅素。在體外將血紅素與牛血清白蛋白結合制備成含血紅素的蛋白質分子作為模擬過氧化物酶。在確定血紅素與牛血清白蛋白結合后,檢測其的過氧化物酶活性。然后將此人工模擬酶固定在載體瓊脂糖凝膠...
多聚酶鏈式反應( PCR) 基因擴增及瓊脂糖凝膠電泳檢測2014/4/24
PCR用于擴增位于兩端已知序列之間的DNA區段,即通過引物延伸而進行的重復雙向DNA合成。基本原理及過程如下:PCR循環過程中有三種不同的事件發生:(1)模板變性;(2)引物退火;(3)熱穩定dna聚...
士鋒生物瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA2014/4/23
原理:瓊脂糖是從海藻中提取出來的一種線狀高聚物,可作為電泳支持物,適用于分離大小范圍在0.2-50kb的DNA片段。DNA分子的遷移率與分子量的對數值成反比關系。觀察其遷移距離,與標準DNA片段進行對...
士鋒生物液相色譜常見故障的斷定及解決常見故障的斷定與解決方法2014/4/17
診狀可能的原因解決方法(一)保留時間變化1.柱溫變化柱恒溫,必要時需配置恒溫箱2.等度與梯度間未能充分平衡至少用10倍柱體積的流動相平衡柱3.緩沖液容量不夠用》25mmol/L的緩沖液4.柱污染每天沖...
士鋒生物吸附柱色譜的相關實驗技術2014/4/17
1.吸附劑的選擇及處理吸附劑分為無機吸附劑如硅膠、氧化鋁、活性炭、氧化鎂、碳酸鈣、磷酸鈣,有機吸附劑如纖維素、淀粉、蔗糖、聚酰胺等。一般來說,所選擇吸附劑應有較大的比表面積和足夠的吸附能力:對欲分離的...
士鋒生物DNA的瓊脂糖凝膠電泳2014/4/15
一、原理DNA在堿性的溶液中帶有負電荷,因此,在電場作用下朝正極移動。在瓊脂糖凝膠中電泳時,由于瓊脂糖凝膠具有一定孔徑,長度不同的DNA分子由于所受凝膠的阻遏作用大小不一,遷移的速度不同,從而可以按照...
士鋒生物植物種子中主要不飽和脂肪酸的分離2014/4/14
一、原理在紙層析中,通常支持相是含水的,移動相是有機溶劑.但是脂肪酸(fattyacid)等化合物宜用有機溶劑為支持相和以含水溶劑為移動相,這樣能更好地進行分配,也就是所謂“反相紙層析法”。由于不同的...
士鋒生物熒光原位雜交2014/4/10
實驗原理熒光原位雜交(FluorescenceinsituhybridizationFISH)是一門新興的分子細胞遺傳學技術,是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放...
不同作物不同發育時期過氧化物酶同工酶的比較分析2014/4/9
一、原理聚丙烯酰胺是由丙烯酰胺(簡稱Acr)和交聯劑甲叉雙丙烯酰胺(簡稱Bis)在催化劑過硫酸銨(AP)和加速劑四甲基乙二胺(簡稱TEMED)的作用下,聚合而成的具有三維網狀結構的凝膠,通過改變聚丙烯...
士鋒生物純種微生物的分離、轉種和培養2014/4/3
一、實驗目的1、了解微生物分離和純化的原理;2、掌握常用的分離純化微生物的方法;3、掌握菌落特征的觀察。4、學習掌握微生物的幾種接種技術5、建立無菌操作的概念,掌握無菌操作的基本環節二、實驗原理從混雜...
士鋒生物沙門氏菌回復突變實驗2014/4/1
目的:學習利用細菌檢測基因突變的方法Ames試驗即鼠傷營養缺陷型回復突變試驗,是目前檢測基因突變zui常用方法之一。原理:利用鼠傷突變株,即缺陷型,其原始菌株菌體內的是通過自身一系列酶催化反應合成的,...

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