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當前位置：上海士鋒生物科技有限公司>>技術文章>>士鋒生物植物種子中主要不飽和脂肪酸的分離
一、原理
在紙層析中，通常支持相是含水的，移動相是有機溶劑.但是脂肪酸（fattyacid）等化合物宜用有機溶劑為支持相和以含水溶劑為移動相，這樣能更好地進行分配，也就是所謂“反相紙層析法”。由于不同的脂肪酸在兩相中分配系數不同，所以在層析濾紙上移動速率就有差異，這樣就使混合脂肪酸各組分被分開。然后用醋酸銅處理，將脂肪酸轉化為相應的銅鹽，再用紅氨酸顯色，即可得到藍灰色點狀層析圖譜。
二、材料、儀器設備及試劑
材料：油菜籽。
（二）儀器設備：1. 層析紙；2. 層析缸；3. 層析架；4. 顯色盤；5. 烘箱或電吹風；6.微量進樣器。
（三）.試劑。
三、實驗步驟
（一）樣品制備切樣：將一粒干燥的油菜種子，用刀片沿著與臍平行的方向切下外子葉一部分（注意不要損傷胚），裝入小指管中（或用有穴白瓷板代替），也可采用整粒種子。酯化：向盛有樣品的小試管中加入0.1ml（2滴）KOH-CH3OH溶液，并將樣品用玻棒研碎，然后放置6～8h。加入0.15ml（2～3滴）1mol/L HCl及0.1ml（2滴）石油醚。
（二）點樣在層析紙一邊用鉛筆輕輕劃一直線，每隔1.5cm用鉛筆輕輕點一記號，編號。將層析紙放入石臘油溶液中浸泡，取出涼干（使編號向上）。在層析紙各編號處，用針刺一小孔，然后用毛細管取樣品上清液0.01ml，按編號順滴入孔洞處（每次取樣后，用石油醚洗微量進樣器的針頭）。
（三）展開溶劑系統與條件將點好樣的層析紙固定在層析架上（使編號朝下），放入盛有醋酸溶液的層析缸中，醋酸溶液的多少以能浸泡層析紙但液面低于點樣處為宜。至展層劑上升到距濾紙頂端1cm處為止，取出層析紙，涼干。
（四）顯色：將層析紙浸入醋酸銅溶液中，使生成脂肪酸銅鹽.用清水稍許沖洗，再放入潔凈的瓷盤中，用流水漂洗0.5h左右。將層析紙小心取出，用干毛巾或濾紙吸干大部分水分后，置于40℃烘箱中干燥。將層析紙在紅氨酸溶液中一帶而過，與脂肪酸銅鹽作用立即顯出藍灰色的斑點。
四. 結果分析
繪出反相紙層析色譜上五種不飽和脂肪酸的位置的示意圖。
［附注］：油菜籽中不飽和脂肪酸在反相紙層析圖譜中的順序由下而上為：芥酸、花生烯酸、油酸、、亞麻酸。
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