士鋒生物甲醛滴定法測定氨基酸含量

時間：2014/5/8閱讀：1163

二、原理
水溶液中的氨基酸為兼性離子，因而不能直接用堿滴定氨基酸的羧基。甲醛可與氨基酸上的—N+H3結(jié)合，形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羥甲基衍生物，使N+H3上的H+游離出來，這樣就可以用堿滴定N+H3放出H +，測出氨基氮，從而計算氨基酸的含量。
若樣品中只含有單一的已知氨基酸，則可由此法滴定的結(jié)果算出氨基酸的含量。若樣品中含有多種氨基酸（如蛋白質(zhì)水解液），測不能由此法算出氨基酸的含量。
與甲醛作用后，生成的化合物不穩(wěn)定，導(dǎo)致滴定后結(jié)果偏低；含酚基結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致滴定結(jié)果偏高。

三、材料、試劑與器具
（一）試劑
1、0.5%酒精溶液
稱0.5g溶于100ml60%酒精中。
2、0.05%溴藍(lán)溶液
取0.05溴麝行草酚藍(lán)溶于100ml 20%乙醇溶液中。
3、1%溶液
取1g溶于100ml蒸餾水。
4、標(biāo)準(zhǔn)0.100mol/L 氫氧化鈉溶液
5、中性甲本醛溶液
取50ml，加0.5%指示劑約3ml，滴加0.1mol/LnaOH溶液，使溶液呈微粉紅色，臨用前中和。
（二）實驗器具
1、錐形瓶 2、堿式滴定管
1、移液管洗耳球 4、天平
5、容量瓶 6、試劑瓶
7、量筒 8、玻棒與燒杯

四、操作步驟
1、取3只100ml錐形瓶，按下表加入試劑。
甲醛滴定法測定氨基酸含量
2、混勻后用標(biāo)準(zhǔn)0.100mol/L氫氧化鈉溶液滴定至紫色（pH8.7~9.0）
3、結(jié)果計算
每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克數(shù)為

五、注意事項
利用甲醛滴淀法可以用來測定蛋白質(zhì)的水解程度。隨著蛋白質(zhì)水解度的增加，滴定值也增加，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)水解完成后，滴定值不再增加。

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