（一）抗原制備

Ig是免疫球蛋白，對(duì)異種動(dòng)物而言，是良好的抗原物質(zhì)。可以刺激異種動(dòng)物產(chǎn)生抗Ig血清，經(jīng)適當(dāng)提取后，產(chǎn)生抗Ig抗體，又叫第二抗體或抗抗體。在多數(shù)的間接標(biāo)記反應(yīng)中，均需制備抗Ig抗體。

（二）材料與試劑

1.提取的動(dòng)物Ig

2.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑

3.和

4.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔

5.其它材料及試劑

（三）操作方法

1.免疫方法 可以采用以下各種方法之一進(jìn)行免疫。

（1）淋巴結(jié)注射法：①在兔的兩后足跖部皮下（或皮內(nèi)）注射活卡介苗50mg（每側(cè)約0.30ml）。7～10天后，兔跖及腘肌淋巴結(jié)腫大;②于腫大的兩側(cè)淋巴結(jié)內(nèi)各注射加有*佐劑的IgG乳化抗原0.50ml（含IgG 5mg/ml、1 000U/ml、1 000μg/ml）;③必要時(shí)，14天后，重復(fù)步驟②一次;④再過7天后，于兩側(cè)淋巴結(jié)內(nèi)各注射加有*佐劑的IgG乳化抗原0.50ml（含IgG5mg/ml、1 000U/ml、1 000μg/ml）;⑤5～7天后，耳靜脈采血。測(cè)定血清效價(jià)。

（2）皮下多點(diǎn)注射法：①家兔兩側(cè)掌（跖內(nèi)各注射含有*佐劑抗原0.10ml（IgG含量5mg/ml）;②7～10天后，脊柱兩側(cè)多點(diǎn)（頸、胸、腰椎各兩點(diǎn)、共6點(diǎn)）皮下注射含不*佐劑的抗原，每點(diǎn)0.50ml;③7～10天后，脊柱兩側(cè)重復(fù)注射一次;④7～10天后試血。不合格者重復(fù)步驟③。

（3）多途徑聯(lián)合注射法：①兩側(cè)掌（跖）內(nèi)側(cè)皮下注射含*佐劑抗原0.50ml（IgG量為5mg/ml）;②14天后，多點(diǎn)皮下注射含有不*佐劑抗原;③7天后，耳靜脈注射不含佐劑的抗原2ml;④測(cè)定血清抗體效價(jià)，不合格者重復(fù)步驟③，并適當(dāng)遞增IgG量。

2.效價(jià)測(cè)定 采用瓊脂擴(kuò)散法。

（1）將血清倍比稀釋，加入外周孔。

（2） 中間孔加動(dòng)物Ig。

（3） 37℃濕盒瓊擴(kuò)24小時(shí)，觀察結(jié)果。

（四）結(jié)果判定

1.抗Ig的效價(jià)測(cè)定 瓊脂擴(kuò)散效價(jià)達(dá)1﹕16或1﹕32者為合格。

2.純度鑒定 采用瓊擴(kuò)法。中間孔加抗Ig血清，外周孔加Ig和標(biāo)準(zhǔn)品Ig。在抗Ig與Ig以及標(biāo)準(zhǔn)品Ig均出現(xiàn)一條沉淀線，且這兩條沉淀線相互融合者，說明提取的Ig是純的。