MycoLight 活細(xì)菌熒光成像試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)細(xì)菌的試劑盒，該活細(xì)菌熒光成像套件提供了一種簡(jiǎn)便方法，可通過熒光顯微鏡可視化活細(xì)菌。 MycoLight 520是一種非熒光酯酶底物，可擴(kuò)散到革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌中。 通過細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)非特異性酯酶水解后，會(huì)產(chǎn)生綠色熒光產(chǎn)物，并在細(xì)菌內(nèi)積累。 與常用的酯酶底物CFDA和CFDA-AM相比，該試劑盒可提供更明亮，更穩(wěn)定的信號(hào)，具有更低的背景和更容易的染色方案。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的MycoLight 活細(xì)菌熒光成像試劑盒。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.準(zhǔn)備100X染料儲(chǔ)備溶液
2.準(zhǔn)備細(xì)菌樣品
3.添加MycoLight 520
4.將細(xì)菌樣品與MycoLight 520信號(hào)增強(qiáng)劑在黑暗中于37°C孵育5-10分鐘或在室溫下孵育60分鐘
5.通過帶有FITC濾光片組的熒光顯微鏡分析樣品

溶液配制

1.儲(chǔ)備溶液配制

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1MycoLight 520儲(chǔ)備液（100X）：
將100 uL DMSO（組分D）添加到MycoLight 520（組分A）小瓶中，制成100X儲(chǔ)備液。

樣品示例及操作

1.準(zhǔn)備細(xì)菌樣品，濃度范圍為106到108個(gè)細(xì)胞/ ml。在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中使細(xì)菌生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)后期。通過以10,000 x g離心10分鐘除去培養(yǎng)基，然后將沉淀重新懸浮在測(cè)定緩沖液（組分C）中。注意：在波長(zhǎng)= 600 nm（OD600）處測(cè)量細(xì)菌培養(yǎng)物的光密度，以確定細(xì)胞數(shù)。對(duì)于大腸桿菌培養(yǎng)，OD600 = 1.0等于8 x 108細(xì)胞/ ml。

2.根據(jù)需要用測(cè)試化合物處理細(xì)胞。通過以10,000 x g離心10分鐘來去除處理液，然后將沉淀物重新懸浮在適量的測(cè)定緩沖液（組分C）中，以使處理過的樣品中細(xì)菌的濃度與活菌濃度相同。注意：開始治療之前，請(qǐng)確定細(xì)菌培養(yǎng)物的濃度。注意：死細(xì)菌可以作為陰性對(duì)照，建議使用70％乙醇?xì)⑺兰?xì)菌30分鐘，然后煮沸60分鐘。

3.將1 µL 100X MycoLight 520儲(chǔ)備液和10 µL 10X Signal Enhancer（組分B）加到90 µL的測(cè)定緩沖液細(xì)菌樣品中。

4.充分混合并在黑暗中于37°C孵育5-10分鐘，或在室溫孵育60分鐘，以獲得佳染色效果。

5.使用熒光顯微鏡通過FITC（Ex / Em = 488/530 nm）通道監(jiān)控細(xì)菌的熒光。注意：相同的方案也可用于酶標(biāo)儀檢測(cè)。