樣品分析

1.準備線粒體染色溶液：

1.1將所有組件溫度調至室溫。

1.2通過將20μLMitolite Orange（組分A）稀釋到10mL活細胞染色緩沖液（組分B）中制備染料工作溶液

注1：對于一個96孔板，20μL的500X Mitolite Orange（組分A）就足夠了。在≤-20oC下等分并儲存未使用的500X Mitolite Orange。避光，避免反復凍融循環。

注2：熒光線粒體指示劑的濃度根據具體應用而變化。可以根據特定細胞類型和細胞或組織對探針的滲透性來修改染色條件。

2.準備和染色細胞：

2.1對于粘附細胞：在96孔黑色墻壁/透明底板上或在裝有適當培養基的培養皿內的蓋玻片上培養細胞。當細胞達到所需的匯合時，加入等體積（例如對于96孔板為100μL，對于384孔板為25μL）的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37oC，5％CO2培養箱中孵育30分鐘至2小時。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長培養基緩沖液）替換染料上樣溶液。

注意：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。

2.2對于懸浮細胞：以1000rpm離心細胞5分鐘以獲得細胞沉淀并吸出上清液。在預熱（37℃）生長培養基中輕輕重懸細胞沉淀，并加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37oC，5％CO2培養箱中孵育30分鐘至2小時。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長培養基緩沖液）替換染料上樣溶液。

注1：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或培養時間以使染料積累。

注2：懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為粘附細胞染色（見步驟2.1）。