細胞:CEF細胞
中文名稱:雞成纖維細胞
生長特性:貼壁細胞
CEF細胞培養基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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成熟腦細胞表面的三種特定蛋白量的增加可促使細胞產生新的生長延伸。
該研究探討了小鼠腦神經細胞上的三個相關的受體蛋白:GPR3,GPR6和GPR12。
研究增加這三種蛋白的量后,細胞生長延伸比蛋白水平正常時的神經細胞的生長大三倍,延伸速度比對照細胞快4-8倍。
結果顯示:這三種蛋白可能是用于治療中風、腦和脊髓損傷及神經退行性疾病的重要靶點。
這些蛋白量的增加與神經細胞cAMP內的一種重要的信號分子的水平的增加有關。這個分子在調控神經細胞生長、分化和生存,以及傳輸神經沖動的軸突再生中起著關鍵作用。
隨著哺乳動物神經細胞的成熟,其細胞內的cAMP水平下降,這可以部分解釋為什么成熟神經細胞受損的軸突不能再生。
為cAMP在軸突生長中起著重要作用這一觀點提供了更多證據,并顯示出這些受體蛋白可能在調節神經細胞cAMP的產生中起主要作用。
從小鼠與大鼠腦組織神經母細胞瘤中取得神經細胞,使之在培養基中生長以了解更多關于這三種蛋白及其調控cAMP生長中的作用。
向這些細胞中注入三種基因以增加這三種蛋白的含量水平,然后用一種被稱為核糖核酸干擾的實驗室技術關閉這三種蛋白的產生。
上述三個蛋白分子中GPR3在神經細胞中最為豐富,而GPR12刺激神經細胞延伸的作用強。
研究表明,阻斷GPR3的產生會大大減慢神經細胞的生長速度,研究者們通過修復GPR3或GPR12的產生扭轉了這種效應。
三種蛋白質的含量水平高也與較高水平的cAMP有關,同時GPR6和GPR12能增加兩倍到三倍的水平。
這三種蛋白能加快神經細胞的生長即使在抑制分子的存在下也是如此,我們迫切希望能找出可以在臨床前中風或脊髓損傷動物模型身上重現此結果的方法。