細(xì)胞：CAOV-3細(xì)胞
中文名稱：人乳頭狀卵巢腺癌細(xì)胞
生長特性：貼壁細(xì)胞
CAOV-3細(xì)胞培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
CAOV-3細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉yi酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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Nocturnin的基因，它編碼的蛋白質(zhì)存在于哺乳動(dòng)物多種身體組織(包括肝臟)中。當(dāng)生物鐘基因Nocturnin在老鼠體內(nèi)失活的時(shí)候，即使對(duì)它們喂以高脂肪的食料，它們也不會(huì)胖起來。
我們有證據(jù)表明生物鐘本身在變異的老鼠體內(nèi)發(fā)揮著正常的作用,但是油脂和葡萄糖代謝的很多方面都紊亂了。
研究人員破壞了一組老鼠的Nocturnin基因，然后對(duì)其中的一些老鼠喂以標(biāo)準(zhǔn)的食料，同時(shí)對(duì)另外的老鼠喂以高脂肪的食料。(CEC細(xì)胞培養(yǎng)條件：90%高糖DMEM、10% 胎牛血清、貼壁細(xì)胞)
對(duì)正常的老鼠喂以標(biāo)準(zhǔn)的食料后，它們?cè)谕庑紊虾托袨樯隙几５睦鲜鬅o甚差別。它們看起來小巧玲瓏，在輪子上不停地竄來竄去，并且在一天的同一時(shí)間內(nèi)一直保持著活躍。
體內(nèi)缺乏Nocturnin基因的老鼠在喂以高脂肪食物后，體重只有輕微的增加。而當(dāng)正常的老鼠在喂以高脂肪食物后，體重暴漲到了缺乏Nocturnin老鼠的兩倍。另外，野生的老鼠在它們的肝臟周圍聚集了大量的脂肪，而缺乏Nocturnin基因的老鼠則沒有。
如果你只關(guān)注于肥胖的話，那么沒有這個(gè)基因?qū)λ鼈儊碚f挺不錯(cuò),但是，變異的老鼠在正常食料的喂養(yǎng)下也改變了葡萄糖代謝。
很可能是Nocturnin，這種產(chǎn)生于多種組織(包括肝臟、肥大細(xì)胞、胰腺、內(nèi)臟)的蛋白，對(duì)于油脂和葡萄糖代謝存在著多個(gè)層面上的影響。(CEF細(xì)胞培養(yǎng)條件：90%高糖DMEM、10% 胎牛血清、貼壁細(xì)胞、雞成纖維細(xì)胞)
這種影響觸發(fā)了對(duì)胰腺分泌胰島素的阻抗，而胰島素的功能在于將血液中的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)至單獨(dú)的細(xì)胞中并轉(zhuǎn)化為能量。胰島素分泌量低或者有分泌阻抗的人易患II型糖尿病。
研究小組將繼續(xù)研究Nocturnin基因的分子作用機(jī)制，不僅僅是在肝臟中，也將在其它產(chǎn)生蛋白質(zhì)的身體組織中，比如眼睛、大腦和腎臟。
