細胞：CaES-17細胞
中文名稱：人食管癌細胞
生長特性：貼壁細胞
CaES-17細胞培養基：1640 培養基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
收到細胞后請盡快更換配套培養基，或自己配置的新鮮培養基(含15%血清)，如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基，請在原瓶培養基中額外添加10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時)。
CaES-17細胞傳代：
1)：細胞密度約80%時，吸出原培養瓶中的培養基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況，把握消化時間)。
2)：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時；
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續消化)
直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。
3)：取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中，添加適當的培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養。
4)：注意培養基PH值變化情況，定期換液(每周2-3次)，待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
(網絡信息主針對網絡推廣作用，僅供參考，細胞培養請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；)
豬腦心肌炎病毒(EMCV)核酸擴增檢測 (RNA提取)
1.1樣品處理
腦、心肌等固體組織標本：取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿或剪刀剪碎，加入500μl RNA提取液A(Trizol reagents)，研磨或振蕩，轉移到1.5mL的EP管中，室溫放置5min。
血清樣品或病毒液：取100 μl釋出血清或病毒液加入500μl RNA提取液A(Trizol reagents)充分震蕩，室溫放置5min。
1.2.加入100μl氯仿，用力震蕩15s，室溫靜置5min， 4℃ 13,000rpm離心5min。
1.3.小心將上層水相轉移到干凈離心管中，加300 μl 無水乙醇，另加10μl RNA提取液B(內含不溶物，使用前室溫溶解并充分混勻)，充分混勻，13,000rpm離心1min。
1.4.棄上清，加入500 μl 75%的DEPC乙醇，充分混勻，13,000rpm離心1min，小心吸去大部分乙醇。
1.5.將提取管敞口在室溫空氣中干燥5min待乙醇揮發干凈，用20µl DEPC H2O溶解沉淀。
陰性質控品：取100μl陰性質控品加入500μl RNA提取液A(Trizol reagents)充分震蕩，后按1.2~1.5操作。
EMCV陽性質控品：直接取3μl進行PCR擴增。
結果分析判定：
反應結束后保存檢測數據文件。根據分析后圖像調節baseline的start值(3~8)，stop值(13~18)以及Threshold值，使Std curve 窗口下的標準曲線達到最佳(correlation數值介于-0.97~-1之間，correlation數值等同于∣r∣值)，最后到Reporter窗口下記錄儀器自動分析計算出的未知標本數值(Qty-Copies/ml)。
