細胞：BT-325細胞
中文名稱：人腦多型膠質母細胞瘤細胞
生長特性：貼壁細胞
BT-325細胞培養基：1640 培養基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
收到細胞后請盡快更換配套培養基，或自己配置的新鮮培養基(含15%血清)，如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基，請在原瓶培養基中額外添加10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時)。
BT-325細胞傳代：
1)：細胞密度約80%時，吸出原培養瓶中的培養基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況，把握消化時間)。
2)：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時；
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續消化)
直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。
3)：取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中，添加適當的培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養。
4)：注意培養基PH值變化情況，定期換液(每周2-3次)，待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
(網絡信息主針對網絡推廣作用，僅供參考，細胞培養請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；)
豬腦心肌炎病毒(EMCV)核酸擴增檢測(標本采集)：
豬腦、心肌以及淋巴結等組織標本：采集可疑病死豬或撲殺病豬疑似組織約1g左右，置入1.5ml潔凈EP管，立即送檢。
血清： 用一次性無菌注射器抽取受檢豬耳靜脈或者前腔靜脈靜脈血2-5ml，靜置斜放待血清析出， 1,0000rpm離心3分鐘，可取上清立即用于測試；或吸取上部血清(約500µl)轉入無菌1.5ml Eppendoff管，立即送檢。
適用儀器：主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM 7300、LightCycler等毛細管的儀器，MJ Opticon系列或取得資格認證的定量PCR儀。
質控標準：
陰性質控品：全部陰性。沒有熒光值增長。
EMCV-陽性質控品：陽性質控品的 Ct 值均應小于 35.0。
∣r∣≥0.97(correlation數值介于-0.97~-1之間，correlation數值等同于∣r∣值)。
以上條件應同時滿足 ，否則，此次試驗視為無效，全部試驗應重新進行。
【結果判定】
測定結果的計算：
如果Ct值﹤38，則實驗樣品的EMCV RNA含量(基因拷貝數/ml)= Qty-Copies/ml；
如果38﹤Ct值﹤40,為灰區建議重新檢測，重新檢測若38﹤Ct值﹤40判為陽性，否則為陰性。
如果Ct值=40，則EMCVRNA含量(基因拷貝數/ml)﹤1×10P2PCopies/ml (低于檢測下限)。
