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【摘要】  　　目的： 觀察原發(fā)性高血壓患者外周血白介素-6（IL-6）基因表達(dá)，初步探討其與原發(fā)性高血壓的關(guān)系及其意義。方法: 用放射免疫法測(cè)定62例原發(fā)性高血壓患者和30例正常對(duì)照者外周血IL-6蛋白含量，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-6 mRNA表達(dá)。結(jié)果： 與對(duì)照組比較，原發(fā)性高血壓組患者外周血IL-6蛋白水平及外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-6 mRNA表達(dá)均顯著增高（P<0.01）。結(jié)論： IL-6可能參與了原發(fā)性高血壓的病理生理過(guò)程，外周血單個(gè)核細(xì)胞的IL-6 mRNA表達(dá)上調(diào)可能是原發(fā)性高血壓患者外周血IL-6蛋白水平升高的機(jī)制之一。

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【關(guān)鍵詞】  白細(xì)胞介素6； 基因表達(dá)； 高血壓； 血液

　　［Abstract］ Objective: To observe the expression changs of interleukin-6 （IL-6） in peripherial blood of patients with essential hypertension （EH）, and to probe the relationgship between IL-6 mRNA level and EH. Methods: The concentrations of circulating IL-6 of 62 EH patients （group EH） and 30 normal people （group CN） were measured by using radioimmunoassay, and the expression of mRNA of IL-6 in mononuclear cells was measured with reverse transcription polymerase chain reaction. Results: The concentration of protein IL-6 in peripherial blood and IL-6 mRNA in mononuclear cell of group EH were significantly higher than those of group CN （P<0.01）. Conclusions: IL-6 might participate the patho-physiology process of EH.; Up-regulating expression of IL-6 mRNA may be one of the mechanisms increasing protein IL-6 in peripherial blood of EH patient.

　　［Key words］  interleukin-6；gene expression; hypertension；blood

    原發(fā)性高血壓（essential hypertension,EH）是以體循環(huán)動(dòng)脈壓升高為主要表現(xiàn)的臨床綜合征，嚴(yán)重危害人類健康，但其發(fā)病機(jī)制及某些病理過(guò)程仍未*闡明。近年來(lái)研究提示，炎癥介質(zhì)在EH發(fā)生發(fā)展的不同階段發(fā)揮了重要作用，但目前針對(duì)炎癥介質(zhì)基因表達(dá)方面的檢測(cè)與分析尚少見(jiàn)。2007年2月~12月檢測(cè)62例EH患者外周血白介素-6（interleukin-6,IL-6）蛋白水平及單個(gè)核細(xì)胞IL-6 mRNA的表達(dá)，探討外周血IL-6的變化與EH的關(guān)系。

　　1  對(duì)象與方法

　　1.1  對(duì)象及分組　　

　　按《中國(guó)高血壓防治指南（2005年修訂版）》制定的標(biāo)準(zhǔn)，選取心血管科住院和門(mén)診新診斷或未經(jīng)正規(guī)降壓治療的EH患者62例，同時(shí)選取正常的健康體檢者30例作為對(duì)照組。排除繼發(fā)性高血壓、經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影確診合并冠心病者、血栓出血性疾病、糖尿病、高脂血癥、感染、嚴(yán)重肝腎疾病、自身免疫性疾病及腫瘤性疾病、近期有手術(shù)或外傷史等影響IL-6水平的患者。

　　1.2  方法

　　1.2.1  主要試劑和儀器 

　　人淋巴細(xì)胞分離液（上海捷瑞），Trizol試劑（美國(guó)Invitrogen），焦炭酸二乙酯（瑞興），逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Promega），PCR試劑盒（Promega），100 bp DNA Ladder Marker、D2000 DNA Marker，人IL-6放射免疫分析藥盒；ULT-1386-3三洋-80 ℃低溫冰箱（日本），5745臺(tái)式冷凍離心機(jī)（德國(guó)），Eppendorff centrifuge 5810R 高速離心機(jī)，Amersham核酸蛋白分析儀，PCR儀（PE geneAmp PCR System 2400）（Perkin Elmer），DNA成像分析儀（Gel Doc EQ）（Bio-Rad），酶標(biāo)儀（ELx800）（Bio-Tek公司）。引物設(shè)計(jì)由上海生物工程公司合成：IL-6上游引物5' -GAGGAGACTTGCCTGGTGAA -3'，下游引物5' -ATCTGAGGTGCCCATGCTAC -3'；β－action上游引物5'-AGCGAGCATCCCCCAAAGTT -3'，下游引物5'-GGGCACGAAGGCTCATCATT -3'。

　　1.2.2  標(biāo)本采集 

　　受檢者空腹12 h，次日清晨采集肘正中靜脈血8 ml，其中4 ml置普通生化管中，室溫靜置2 h，自然凝固后，1 000 r/min，離心10 min，收集上清液置于-80 ℃冰箱保存待測(cè)；另4 ml置于EDTA抗凝試管中搖勻后即刻置4 ℃冰箱冷存，6 h內(nèi)提取RNA。

1.2.3  外周血IL-6蛋白含量測(cè)定 

　　用保存待測(cè)的血清，嚴(yán)格依照IL-6放射免疫分析藥盒說(shuō)明書(shū)的步驟操作。

　　1.2.4  人血單個(gè)核細(xì)胞中RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR） 
　　淋巴細(xì)胞分離液提取外周血中單個(gè)核細(xì)胞后，按照說(shuō)明書(shū)的步驟提取總RNA，再按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟合成cDNA，并用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的片段。PCR產(chǎn)物用1.5% 瓊脂糖凝膠電泳，溴乙錠顯色。測(cè)定各條帶灰度值，以β-actin為內(nèi)參，用IL-6與β-actin的灰度比值定量IL-6。

　　1.3  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，數(shù)據(jù)以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)  33卷    6期張玲玲等  原發(fā)性高血壓患者外周血白介素-6基因表達(dá)及意義2  結(jié)果　　EH組和正常對(duì)照組間的年齡、性別、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、總膽固醇、空腹血糖和外周血白細(xì)胞比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（見(jiàn)表1）。 EH患者外周血IL-6水平及單個(gè)核細(xì)胞IL-6 mRNA表達(dá)的變化見(jiàn)表2，與對(duì)照組比較，EH組外周血IL-6蛋白水平及單個(gè)核細(xì)胞IL-6 mRNA表達(dá)均顯著增高（P＜0.01）。表1  EH組及對(duì)照組的基本資料（略）表2  EH患者及對(duì)照組外周血IL-6水平（略）注：與對(duì)照組比較,（1）P＜0.01。

　　3  討論　　

　　原發(fā)性高血壓的發(fā)病機(jī)制及某些病理過(guò)程至今尚未*闡明，有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)高血壓與炎癥有關(guān)，提示炎癥可能在高血壓的發(fā)病機(jī)制中起重要作用[1]。IL-6是一種參與免疫和炎癥反應(yīng)的多功能促炎細(xì)胞因子，體內(nèi)單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等均可分泌IL-6。IL-6作為重要的炎性細(xì)胞因子之一，在心血管系統(tǒng)中的作用越來(lái)越受到重視。本研究顯示，原發(fā)性高血壓組患者外周血IL-6蛋白水平明顯高于對(duì)照組，提示IL-6可能參與了原發(fā)性高血壓的病理生理過(guò)程。因此，積極探索控制炎癥的方法可能是原發(fā)性高血壓病治療的前景策略之一。　　

　　原發(fā)性高血壓患者外周血IL-6升高的機(jī)制尚不十分明了。近年來(lái)雖已有研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)性高血壓患者外周血AngⅡ、IL-6、內(nèi)皮素-1等細(xì)胞因子水平增高，并認(rèn)為細(xì)胞因子可能與原發(fā)性高血壓的發(fā)生發(fā)展相關(guān)[2~6]，但針對(duì)原發(fā)性高血壓患者在外周血單個(gè)核細(xì)胞中的IL-6 mRNA表達(dá)水平方面的檢測(cè)與分析少見(jiàn)報(bào)道。本研究顯示，與對(duì)照組比較，原發(fā)性高血壓組外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-6 mRNA表達(dá)顯著增高，提示外周血單個(gè)核細(xì)胞的IL-6 mRNA表達(dá)上調(diào)可能是導(dǎo)致原發(fā)性高血壓患者外周血IL-6蛋白含量升高的一個(gè)因素。IL-6可能通過(guò)以下機(jī)制影響原發(fā)性高血壓的發(fā)生發(fā)展：（1）升高血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，引起血管收縮；（2）使白細(xì)胞流變學(xué)特性發(fā)生改變，易黏附于血管內(nèi)皮細(xì)胞，增加血管阻力；（3）從多種途徑促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增生、增殖，導(dǎo)致血管重構(gòu)；（4）損傷血管內(nèi)皮；（5）IL-6還可能與多種高血壓危險(xiǎn)因素協(xié)同促進(jìn)高血壓的發(fā)生和發(fā)展[7]。

【參考文獻(xiàn)】
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　　[4]Luft FC. Angiotensin, inflammation, hypertension, and cardiovascular disease[J]. Curr Hypertens Rep,2001（3）:61-67.

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　　[6]王艷軍,何冰,李曉東.TNF-α、IL-6、NO在高血壓胰島素抵抗患者血漿中的變化及意義[J]. 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2006（5）:525-526,529.

　　[7]Hirano T.Interleukin 6 and its receptor. ten years later[J]. Int Rev Immunol, 1998（324）:249-284.