微生物液體培養實驗

【資料簡介】

過培養法
實驗方法原理    
 
 
實驗材料    細菌
試劑、試劑盒    胰化蛋白胨酵母提取物氯化鈉NaOH
儀器、耗材    接種針培養瓶搖床
實驗步驟    
1.  取5 ml 液體培養基加入一支無菌的16 mm 或18 mm 的培養試管中。 

2.  用接種環挑一個單菌落，浸沒于培養液中并輕輕振動接種環，使待接種的細菌分散在培養液中。
 
3.  蓋好試管，在搖床或轉鼓式培養裝置上以60 r/min 速度。

4.  于37 ℃培養至飽和（約6 h）新鮮培養至飽和期的培養液細菌濃度大約為1X109~2X109細胞/ml。

大體積培養法

實驗材料    細菌
試劑、試劑盒    胰化蛋白胨酵母提取物氯化鈉NaOH
儀器、耗材    接種針培養瓶搖床
實驗步驟    
1.  按1：100的比例將過培養物加入到一個無菌燒瓶中，燒瓶的體積應該是培養液體積的5倍以上。

2.  于37℃，約300 r/min 劇烈揺動培養。
注意事項    
1.  如果不揺動培養細胞，所用燒瓶的體積應比培養液體積大20倍以上。

細菌培養的檢測

實驗材料    細菌
儀器、耗材    顯微鏡玻片蓋玻片滴管
實驗步驟    
一、利用計數板檢測
 
1.  用一片干凈的蓋玻片蓋住一片干凈的計數玻片或者petraff-Hausser小室，參見下面。

2.  用含少量培養液的吸管接觸蓋玻片的邊緣。
 
3.  在相差顯微鏡400倍下觀察，并且按一個小方塊中所見的每個細菌大約相當于2×107細胞/ml，計算濃度。

二、利用分光光度計檢測 

1.  稀釋培養液至OD600＜1。

2.  按每0.1OD值大約相當于108細胞/ml計算細菌濃度。