細胞沉默調節蛋白1 （SIRT1）活性熒光定量檢測說明書

【資料簡介】

主要用途

  細胞沉默調節蛋白1 （SIRT1）活性熒光定量檢測試劑是一種旨在通過熒光探針氨甲基香豆素標記人工合成的乙酰化p53多肽底物，經過SIRT1脫乙酰基后，被位點特異性氨基肽酶水解，釋放黃色對硝基苯胺，即采用熒光法來測定細胞裂解萃取樣品中酶活性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細胞裂解萃取液樣品（動物、人體）、核蛋白樣品、部分或*純化酶樣品中SIRT1的活性定量檢測，以及抑制劑和激活劑的篩選。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。

技術背景

人體組蛋白脫乙酰基酶（histone deacetylase；HDAC）家屬分成三類共20多個蛋白：種類I（class I）與酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于細胞核中；種類II（class II）與酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于細胞核和細胞漿里；上述兩大種類的蛋白分子催化結構域含有鋅，且曲古菌素A（trichostatin A；TSA）敏感。種類III（class III）為NAD+輔助因子必需，又稱為sirtuins，與酵母Sir2（Silent Information Regulator 2）同源，包括SIRT1至7等，為曲古菌素A（trichostatin A；TSA）不敏感型賴氨酸脫乙酰基酶（lysyl-deacetylase）。催化賴氨酸脫乙酰基反應，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基團轉化產生的煙酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。SIRT1位于細胞核內，與酵母Sir2同源性zui高。其功能在于調節p53活性和抑制細胞凋亡。基于人工合成的乙酰化p53（379至382氨基酸位點）多肽底物Ac-Arg—His-Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切離的功能，首先使用熒光染料氨甲基香豆素（aminomethylcoumarin；AMC）來標記乙酰化p53多肽底物，其次進行脫乙酰化，zui后底物進一步在氨基肽酶的催化酶解，釋放出具有強烈熒光的7-氨-4甲基香豆素（7-amino-4-methylcoumarin；AMC）（激發波長350-360nm；散發波長450-465nm），由此來定量測定沉默調節蛋白1的活性。其反應系統為：