大鼠Smad4說明書

【資料簡介】

大鼠Smad4實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠Smad4水平。用純化的大鼠Smad4抗體包
被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Smad4，再與HRP標記的Smad4
抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在
HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的
Smad4呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品
中大鼠Smad4濃度。  
大鼠Smad4試劑盒組成 
1  30倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1瓶
2  酶標試劑  6ml×1瓶  8  標準品（8ng/ml）  0.5ml×1瓶
3  酶標包被板  12孔×8條  9  標準品稀釋液  1.5ml×1瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說明書  1份
5  顯色劑A液  6ml×1瓶  11  封板膜  2張    
6  顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個
大鼠Smad4標本要求  
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
大鼠Smad4操作步驟
1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
4ng/ml  5號標準品  150µl 的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
2ng/ml  4號標準品  150µl 的5號標準品加入150µl標準品稀釋液
1ng/ml  3號標準品  150µl 的4號標準品加入150µl標準品稀釋液
0.5ng/ml  2號標準品  150µl 的3號標準品加入150µl標準品稀釋液
0.25ng/ml  1號標準品  150µl 的2號標準品加入150µl標準品稀釋液
 
 
2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，
 
 
然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。      
4.  配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復5次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。  
7.  溫育：操作同3。
8.  洗滌：操作同5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10分鐘.
10.  終止：每孔加終止液50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.  測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。  測定應在加終止
液后15分鐘以內進行。