elisa試劑試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因

【資料簡介】

　　ELISA中常見問題及解決方法
　　
　　ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。現(xiàn)將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。
　　
　　下面分析ELISA試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法
　　
　　1．選擇試劑
　　
　　選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60min。
　　
　　2．加樣
　　
　　可能原因：
　　
　　1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；
　　
　　2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）；
　　
　　3）加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
　　
　　解決辦法：
　　
　　1）標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2h后，再用3000rmp離心15min；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15min；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
　　
　　2）加樣后及時放入孵箱。
　　
　　3）加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
　　
　　4）如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
　　
　　5）標(biāo)本較多時，請分批操作。
　　
　　3．孵育
　　
　　可能原因：
　　
　　1）孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*；
　　
　　2）孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。
　　
　　解決辦法：
　　
　　1）貼封片或加蓋；
　　
　　2）按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
　　
　　4．洗板
　　
　　可能原因：
　　
　　1）采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
　　
　　2）采用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。
　　
　　3）反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
　　
　　解決辦法：
　　
　　1）保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
　　
　　2）合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。
　　
　　5．顯色
　　
　　可能原因：
　　
　　1）顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；
　　
　　2）加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
　　
　　解決辦法：
　　
　　1）顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用；
　　
　　2）加樣時保持顯色劑不外流；
　　
　　3）A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
　　
　　6．終止
　　
　　可能原因
　　
　　如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
　　
　　7．讀板如讀板時板底不清潔等，應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
　　
　　其他說明請下載詳細(xì)說明書