人一氧化氮合成酶（NOS）elisa試劑盒說明書

【資料簡介】

 

人一氧化氮合成酶（NOS）酶聯免疫分析

 

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：                                                           96T

1µmol/L - 32µmol/L

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中一氧化氮合成酶 （NOS）含量。實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人一氧化氮合成酶 （NOS）水平。用純化的人一氧化氮合成酶 （NOS）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入一氧化氮合成酶（NOS），再與 HRP標記的一氧化氮合成酶 （NOS）抗體結合，形成抗體 -抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB顯色。 TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的一氧化氮合成酶 （NOS）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人一氧化氮合成酶 （NOS）濃度。試劑盒組成

1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶 2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（ 64µmol/L） 0.5ml×1瓶 3 酶標包被板 12孔 × 8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份 5 顯色劑 A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 6 顯色劑 B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于 -20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。

4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復 5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻， 37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白空調零， 450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。測定應在加終止

 

32µmol/L 5號標準品 150µl的原倍標準品加入 150µl標準品稀釋液 16µmol/L 4號標準品 150µl的 5號標準品加入 150µl標準品稀釋液 8µmol/L 3號標準品 150µl的 4號標準品加入 150µl標準品稀釋液 4µmol/L 2號標準品 150µl的 3號標準品加入 150µl標準品稀釋液 2µmol/L 1號標準品 150µl的 2號標準品加入 150µl標準品稀釋液

液后 15分鐘以內進行。操作程序總結：

計算

以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。注意事項

 

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（ n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準 .

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。 10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期： 6個月

標本收集方法：
1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
2. 血漿：
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
3. 尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細胞培養上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。
5. 培養細胞
    檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
6. 組織標本
    切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

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