大鼠膜聯(lián)蛋白Ⅰ（ANX-Ⅰ）試劑盒使用說明書

【資料簡介】

 

                      大鼠膜聯(lián)蛋白Ⅰ(ANX-Ⅰ)試劑盒使用說明書 

 

 

              本試劑盒僅供研究使用。 

檢測范圍：

3µg/L -125µg/L

 本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中膜聯(lián)蛋白Ⅰ(ANX-Ⅰ)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠膜聯(lián)蛋白Ⅰ(ANX-Ⅰ)水平。用純化的大鼠

膜聯(lián)蛋白Ⅰ(ANX-Ⅰ)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入膜聯(lián)

蛋白Ⅰ(ANX-Ⅰ)，再與 HRP 標記的膜聯(lián)蛋白Ⅰ(ANX-Ⅰ)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗

體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在

酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膜聯(lián)蛋白Ⅰ(ANX-Ⅰ)呈正相關。用

酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠膜聯(lián)蛋白Ⅰ

(ANX-Ⅰ)濃度。

試劑盒組成

 

1 30 倍濃縮洗滌液

 

20ml×1 瓶

 

7 終止液

 

6ml×1 瓶

 

2 酶標試劑

 

6ml×1 瓶

 

8 標準品（240µg/L） 0.5ml×1 瓶

 

3 酶標包被板

4 樣品稀釋液

5 顯色劑 A 液

6 顯色劑 B 液

標本要求

 

12 孔×8 條

6ml×1 瓶

6ml×1 瓶

6ml×1/瓶

 

9 標準品稀釋液

10 說明書

11 封板膜

12 密封袋

 

1.5ml×1 瓶

1 份

2 張

1 個

 

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，

然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值

大于標準品孔孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計

算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. 

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月