SDS是一種陰離子去垢劑，化學名十二烷基苯磺酸鈉，由于在高溫條件下能裂解細胞并與細胞中多糖結合而被作為提取物質被廣泛使用。SDS法提取主要應用于植物dna的提取和質粒提取，本文對這兩個實驗操作步驟進行講解。

SDS法提取植物基因組DNA

本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的組織細胞用熱的SDS裂解后，加入高濃度的KAc，0℃放置以除去蛋白和多糖類雜質，zui后用乙醇或異丙醇沉淀。

一、材料試劑和儀器

1 材料 新鮮的組織材料或-80℃凍存的材料

2 試劑

(1)提取緩沖液

Tris-HCl 100mmol/L(pH8.0)

EDTA 50mmol/L (pH8.0)

NaCl 500 mmol/L

滅菌后加β-巰基乙醇至10 mmol/L

(2)裂解液20%SDS

(3)高鹽溶液5mol/L KAc

(4) RNaseA 10mg/ml

(5) 異丙醇

(6)滅菌ddH2O或TE

3. 儀器: 離心機， 恒溫水浴, 臺式高速離心機，電泳裝置

二、實驗步驟

1取幼嫩的組織材料1-2g,用蒸餾水沖洗干凈，再用滅菌ddH2O沖洗2次，放入經液氮預冷的研缽中，加入液氮研磨至粉末狀，用干凈的滅菌不銹鋼勺轉移粉末到加有500μL提取液的離心管中,輕輕混勻。

2 向管中加入50μL20%SDS溶液，混勻，不可過于強烈震蕩以防基因組DNA斷裂 ，65℃保溫10min，并不時搖動。

3 加入150μL 5mol/L KAc，混勻，置冰上20-30 min。

4 4℃,15 000rpm離心15min,轉移上清到另一離心管中，加入0.7V的異丙醇，混勻，-20℃沉淀30 min 。

5 12 000rpm離心10min回收基因組DNA沉淀，吹干后加入適量的滅菌ddH2O或TE溶解DNA。

6 加入1/10體積的RNaseA，37℃保溫20min，除去RNA。

7 CI抽提后，加2V乙醇，-20℃沉淀30 min 。12 000rpm離心10min回收基因組DNA沉淀。

8 用400μL 70%乙醇洗一次后，吹干，加入適量的滅菌ddH2O或TE溶解DNA。

9 電泳檢測完整性。

三、結果分析

1. 用紫外分光光度計在230nm、260nm、 280nm和310nm波長分別讀數。其中260nm用瓊脂糖凝膠電泳(0.8%)檢測核DNA的完整性。完整性好的基因組DNA應是一條比23Kb滯后的電泳帶, 若降解則成為彌散狀。電泳前緣為未除干凈的RNA。

2.如果DNA沉淀呈白色透明狀而且溶解后成粘稠狀，說明DNA含有較多的多糖類物質，可以在取材前將植物放暗處24hr，以達到去除淀粉的目的。

3. DNA沉淀呈棕色，難以酶切

植物材料含有大量酚類化合物，與DNA共價結合，使DNA呈棕色，并抑制DNA的酶解反應。為防止此情況出現，可在加入2 ×CTAB的同時加入2-5%的巰基乙醇，或者加入亞精胺(100μl DNA加5μl 0.1mol/L的亞精胺)。

4.DNA中含有多糖或鹽類

將DNA用乙醇或異丙醇沉淀出來，離心，沉淀用70%乙醇清洗兩次或更多次，吹干后重溶于TE中。(注意乙醇一定要吹干, 否則電泳點樣時, 樣品上漂)

5.DNA已降解電泳條帶呈彌散狀

樣品降解可能有兩種情況：一是機械振動過劇烈，二是操作過程中DNase污染。在提取DNA的各個操作過程中要避免劇烈振蕩，提取液及用品要高溫高壓滅菌。另外，使用Tip頭吸取過程中應避免產生氣泡，Tip頭應剪去Tip頭尖，避免反復凍融DNA。

SDS裂解法提取大量質粒

本法的產量低得多，但卻比其他方法更溫和，是提取大質粒(大于15kb)的方法。

試驗步驟：

1. 將500ml細菌沉淀物洗過后重懸于10ml用冰預冷的10%蔗糖、50mmol/L Tris.Cl(pH8.0)溶液中，將懸液移至30ml的帶蓋螺口塑料試管中。

2. 加入2ml新配制的溶液[10mg/ml,溶于10mmol/L Tris.Cl(pH8.0)]。當溶液的pH值小于8.0時，不能有效地發揮作用。

3. 加8ml 0.25mol/L EDTA(pH8.0), 將管倒置數次以混勻懸液，在冰上放置10min。

4. 加4ml 10% SDS，用玻棒迅速混勻內容物，使SDS均勻分散到整個細菌懸液中，操作應盡可能溫和小心，以便zui大限度地避免釋放出來的DNA受到剪切。

5. 立即加入6ml 5mol/L NaCl(終濃度為1mol/L)， 再次用玻棒溫和*地混勻內容物，在冰上放置至少1h。

6. 以4℃[用Beckman Ti50型轉頭(或與其相當的轉頭)]，30 000rpm離心30min，小心將上清轉移到一個50ml的一次性塑料離心管中，棄去沉淀物。如果細菌碎片未能全部除盡，可用35 000rpm再離心20min，將上清轉移到另一管中，去掉存在離心管內的粘稠狀液體。

8. 將水相轉移到250ml的離心瓶中，于室溫加入2倍體積的(約60ml )乙醇，充分混勻，室溫下放置1-2h。

9. 以4℃，5000rpm離心20min，回收核酸。

10. 離心管倒置于紙巾上，使zui后殘存的乙醇流干，在真空干燥內短時間干燥沉淀物，但不要使之*干燥。

11. 用3mlTE(pH8.0)溶解DNA。

zui后，大家要注意的是，植物基因組DNA提取中，各個操作步驟都要避免劇烈振蕩，避免反復凍融DNA。SDS法是提取大于15kb的質粒方法，要注意在真空干燥沉淀物時，不能使其*干燥。