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如何提高PCR擴增的保真性

時間:2015-11-23閱讀:1093
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下游應用為基因篩選、測序、突變檢測和分子診斷等等的用戶,對PCR保真性要求很高。

降低PCR擴增的錯誤率可以通過使用各種具有高保真性的dna聚合酶來實現。

DNA聚合酶的保真度用錯誤率來表示,包括堿基錯配率、PCR產物突變百分數等。

在目前已發現的所有耐高溫DNA 聚合酶中,Pfu酶的出錯率zui低,保真度zui高(見附表)。

除對酶進行選擇,研究者也可通過優化反應條件來進一步減少PCR突變率,包括優化緩沖液組成、耐熱聚合酶的濃度及對PCR循環條件進行優化等。

附表: DNA聚合酶的擴增錯誤率

耐熱DNA聚合酶

堿基錯配率

★PCR產物突變百分數(%)

Pfu DNA Polymerase

1.3×10-6

2.6

Taq DNA Polymerase

8.0×10-6

16.0

VentR ® DNA Polymerase

2.8×10-6

5.6

Deep VentR ® DNA Polymerase

2.7×10-6

5.4

Tfl DNA Polymerase

8.3×10-6

16.6

Tbr DNA Polymerase

9.5×10-6

19.0

ΜlTmaTM DNA Polymerase

55.3×10-6

110.6

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