神經細胞(神經元)不易培養,只有在適宜情況下,如接種在膠原底層上,或加入神經生長因子和膠質細胞因子時,可出現一定程度的分化,長出突起等現象,但很難使之增值。而神經膠質細胞是神經組織中比較容易培養的成分。
人、鼠等腦組織即可用于神經膠質細胞培養,不僅能獲得生長的膠質細胞,也可形成能傳代的二倍體細胞系。一般說來,膠質細胞在培養中生長不穩定,不易自發轉化,但對外界因素仍保持很好的敏感性,可用ROUS病毒和SV4等誘發轉化。
一. 設備: 無菌操作設備。
二. 大型設備CO2培養箱:恒溫5%、10%CO2維持培養液中pH值。
倒置顯微鏡:用于每天觀察貼壁細胞生長情況。
解剖顯微鏡,用于準確地取材。
常溫冰箱:-4℃,用于保存各種培養液,解剖液和鼠尾膠。
低溫冰箱:-20℃--80℃,用于儲存血清酶,貴重物品和試劑。
電熱干烤箱:用于消毒玻璃器皿。
高壓消毒鍋:用于消毒培養皿,手術器械。
過濾器:配制解剖液、培養液,必須過濾后才可使用,以去除細菌。
滲透壓儀,pH劑,天平等。
三. 培養器皿及手術器械
1 培養皿:常用35mm塑料及玻璃皿,解剖取材用15mm-90mm直徑。
2 培養板,24-40孔,可用于開放培養。
3 培養瓶:
4 吸管,常用1,5,10ml,均需泡酸、洗滌、滅菌后方可使用。
5 各類培養液貯存器。
6 小型手術器械。
準備:
一 配制培養液
(1) 解剖液:以無機鹽(去除Ca2+, Mg2+)加葡萄糖配制成PBS緩沖液,保持一定的滲透壓和pH值。
(2) 基礎培養基(MEM):主要為多種氨基酸,加入葡萄糖,雙蒸餾水溶解。
(3) 接種培養液:用于消化后的細胞分散,做成細胞懸液,其成分為MEM含1%,另加入10%馬血清,當天配制。
(4) 維持培養液:接種后24h,全部換成此液,后每2周換一次,每次換1/2。其成分為MEM中含5%馬血清,1%,及適量的支持性營養物質。
二 培養基質 常用鼠尾膠、小牛皮膠,多聚賴氨酸,再涂膠
三消毒培養皿的備用。所有培養器皿均需清水沖洗2-3d,達兩次ddH2O,每遍洗刷3-4次,加塞包裝,置于烤箱中干燥消毒,于培養前1天進行。