核酸是生物體內(nèi)的主要化學(xué)成分，核酸在生物體內(nèi)主要以核蛋白的形式存在。核酸分為脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。DNA主要存在與在細(xì)胞核中，RNA主要存在于細(xì)胞質(zhì)中。
用冰冷的稀三氯乙酸或高氯酸溶液在低溫下抽提菜花勻漿，以除去酸溶性小分子物質(zhì)。再由有機(jī)溶劑如乙醇、等抽提，去除脂溶性的磷脂等物質(zhì)。zui后用濃鹽溶(10%氯化鈉溶液)和0.5mol/L高氯酸(70℃)分別提取DNA 和RNA。
由于核酸和脫氧核糖核酸有特殊的顏色反應(yīng)，經(jīng)顯色后所呈現(xiàn)的顏色深淺在一定范圍內(nèi)和樣品中所含的核糖和脫氧核糖的量成正比。因此可用定糖法來(lái)定性定量測(cè)定核酸。
① 核糖的測(cè)定：測(cè)定核糖的常用方法是苔黑酚法(3，5—二羥基甲苯，即Orcinol反應(yīng))。當(dāng)含有核糖的RNA與濃鹽酸及3，5—二羥基甲苯在沸水水浴中加熱10～20min后，有綠色物產(chǎn)生，這是因?yàn)?/span>RNA脫嘌呤后的核糖與酸作用生成糠醛，后者再與3，5—二羥基甲苯作用生成綠色物質(zhì)。
RNA+濃硫酸+ 綠色化合物
注意：DNA、蛋白質(zhì)和黏多糖等物質(zhì)對(duì)測(cè)定有干擾作用。
② 脫氧核糖的測(cè)定：測(cè)定脫氧核糖的常用方法是二苯胺法。含有脫氧核糖的DNA在酸性條件下和二苯胺在沸水浴中共熱后，產(chǎn)生藍(lán)色。這是因?yàn)?/span>DNA嘌呤核苷酸上的脫氧核糖遇酸生成ω-羥基-6-酮基戊醛，再與二苯胺作用產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)。
DNA+少量濃硫酸或冰乙酸+ 藍(lán)色物質(zhì)
注意：DNA、蛋白質(zhì)和黏多糖等物質(zhì)對(duì)測(cè)定有干擾作用。
此法易受多種糖類及其衍生物和蛋白質(zhì)的干擾。
上述兩種定糖的方法準(zhǔn)確性較差，但快速簡(jiǎn)便，能鑒別DNA和RNA，是鑒定核酸、核苷酸的常用方法。
三、實(shí)驗(yàn)器材
① 恒溫水浴
② 電爐
③ 布氏漏斗裝置
④ 移液管
⑤ 燒杯
⑥ 量筒
⑦ 剪刀
⑧ 研體
四、材料和試劑
① 新鮮菜花
② 95%乙醇
③ 丙酮
④ 5%高氯酸溶液
⑤ 0.5mol/L三氯酸溶液
⑥ 10%氯化鈉溶液
⑦ 標(biāo)準(zhǔn)RNA溶液(5mg/100mL)
⑧ 標(biāo)準(zhǔn)DNA(15mg/100ml)
⑨ 粗氯化鈉
⑩ 海沙
? 二苯胺試劑：將1g二苯胺溶于100ml冰醋酸中，再加入2.75mL濃硫酸(置冰箱中可保存6個(gè)月。使用后，在室溫下?lián)u勻)。
? 三氯化鐵濃鹽酸溶液：將2ml10%三氯化鐵溶液(用FeCl3·6H20配制加入到)400mL濃鹽酸中。
五、操作方法
1. 核酸的分離
①取菜花的花冠20g，剪碎后置于研缽中。加入20mL 95%乙醇和少量誨砂，研磨
成勻漿。然后用布氏漏斗抽濾，棄去濾液。
②向?yàn)V渣中加入20mL丙酮，攪拌均勻,抽濾，棄去濾液。
③再向?yàn)V渣中加人20mL丙酮，攪拌5min后抽濾(用力壓濾渣，盡量除去丙酮)。
④在冰鹽浴中，將濾渣懸浮在預(yù)冷的20mL 5%高氯酸溶液中攪拌抽濾棄去濾液。
⑤特濾渣懸浮于20mL 95%乙醇中，抽濾，棄去濾液。
⑧濾渣中加入20mL丙酮，攪拌5min。抽濾至干.用力壓濾渣盡量除去丙酮。
⑦將干燥的濾渣重新懸浮在40ml10%氯化鈉溶液中，在沸水浴中加熱15mln，放置、
冷卻，抽濾至干，留濾液，并將此操作重復(fù)進(jìn)行一次。將兩次濾液合并，為提取物一。
⑧將濾渣重新懸浮在20mL 0.5mol兒高氯酸溶液中。加熱到70℃。保溫20 min
(恒溫水浴)后抽濾。留濾液為提取物二。
2.DNA和RNA的定性鑒定
①二苯胺反應(yīng)：按表1加入各種試劑，反應(yīng)后觀察現(xiàn)象井記錄結(jié)果。
表1 二苯胺反應(yīng)加入試劑

②苔黑酚反應(yīng)：按表2加入各種試劑，反應(yīng)后觀察現(xiàn)象井記錄結(jié)果。
表2 苔黑酚反應(yīng)加入試劑