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大腸桿菌細胞超聲波破碎

時間:2014/7/1閱讀:2579
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一、原理:微生物細胞在超聲波的作用下,細胞結構受到破壞,而使細胞破碎。

二、材料與試劑:超聲波破碎儀、顯微鏡、燒杯、細胞破碎緩沖液(10mmol/L,PH7.4Tris-HCL緩沖液中含5mmol/L的MgCL2)、細胞懸浮液(取50-100mg)大腸桿菌濕細胞懸浮在1ml細胞破碎緩沖液中)、培養基(牛肉膏0.5%、蛋白胨1%,NaCL0.5%制成肉湯液體培養基。取上述肉湯培養基加進2%瓊脂,制成固體培養基,用作菌種活化與保藏)。

三、操作方法

1、細胞培養和收集:將活化菌種接入肉湯培養基中,于37℃振蕩培養。當到達對數生后(約6h),用離心機收集細胞,8000r/min離心5min,或3000r/min離心20min。

2、在顯微鏡下觀察細菌的形態特征。

3、細胞破碎:取濕細胞50-100mg懸浮于1ml細胞破碎緩沖液中。用20kHz頻率,150W的功率,在冰浴中進行超聲波破碎,每破碎60s,間隔60s,反復破碎三次。

4、在顯微鏡下觀察破碎后的細胞形態。

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