琥珀酸脫氫酶是三羧酸循環(huán)中的一個(gè)重要的酶,測(cè)定細(xì)胞中有無(wú)這種酶可以初步鑒定三羧酸循環(huán)途徑是否存在。
琥珀酸脫氫酶可使其底物脫氫,產(chǎn)生的氫可通過(guò)一系列傳遞體zui后遞給氧而生成水。
在缺氧的情況下,若有適當(dāng)?shù)氖軞潴w也可顯示出脫氫酶的作用。如心肌中的琥珀酸脫氫酶在缺氧的情況下,可使琥珀酸脫氫生成延胡索酸,脫下之氫可將藍(lán)色的甲烯藍(lán)還原成無(wú)色的甲烯白。
這樣,便可以顯示琥珀酸脫氫酶的作用。
琥珀酸脫氫酶的作用及競(jìng)爭(zhēng)性抑制的觀察
丙二酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)與琥珀酸相似,它能與琥珀酸競(jìng)爭(zhēng)而和琥珀酸脫氫酶結(jié)合。若琥珀酸脫氫酶已與丙二酸結(jié)合,則不能再催化琥珀酸脫氫,這種現(xiàn)象稱為競(jìng)爭(zhēng)性抑制。如相對(duì)地增加琥珀酸的濃度,則可減輕丙二酸的抑制作用。
(二)試 劑
1.1.5%琥珀酸鈉溶液:稱取琥珀酸鈉1.5g,用蒸餾水溶解并稀釋至100ml。如無(wú)琥珀酸鈉可用琥珀酸配成水溶液后,以氫氧化鈉溶液中和至pH7~8。
2.1%丙二酸鈉溶液:稱取丙二酸鈉1g,用蒸餾水溶解并稀釋至100ml。
3.0.02%甲烯藍(lán)溶液。
4.1/15mol/LNa2HPO4溶液:取Na2HPO4 · 2H2O 11.8g,用蒸餾水溶解并稀釋至1 000ml。
5.液體石蠟。
(三)操 作
1.豬心臟制備液:稱取新鮮豬心1.5~2.0g放組織搗碎機(jī)中,加入等體積的石英砂及1/15mol/LNa2HPO4溶液3~4ml,搗碎成漿,再加入6~7ml1/15mol/LNa2HPO4溶液,放置1小時(shí),不時(shí)搖動(dòng),離心取上清液備用。
2.取4支試管,編號(hào)并按下表操作:
3.各管溶液混勻后,每管各加液體石蠟一薄層(約5~10滴)。為什么?
4.各管置于37℃水浴中,半小時(shí)內(nèi)觀察各管顏色變化,比較其速度并說(shuō)明原因。然后將第1管用力搖動(dòng),觀察其有何變化?為什么?