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原理
常用于定性檢測，也可用于半定量檢測。將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠板上相鄰近的小孔內，讓它們相互向對方擴散。當兩者在zui適當比例處相遇時，即形成一條清晰的沉淀線。根據有否出現沉淀線，可用已知的抗體鑒定未知的抗原，或用已知的抗原鑒定未知的抗體。臨床常用本方法檢查原發性肝癌患者血清中的甲胎蛋白，作為原發性肝癌的早期輔助診斷。
甲種胎兒蛋白（α-Fetal protein, AFP），是胎兒組織及體液中的正常組織成份。胎兒在第9周才出現此種蛋白，13~19周達高峰，到21周后逐漸下降，胎兒出生后該蛋白即行消失或含量甚微，普通試驗方法檢查不出，而肝癌病人及個別卵巢癌或睪丸癌病人的血清檢出有此種蛋白。
材料
1．抗AFP血清、已知肝癌病人AFP陽性血清、待檢病人血清。
2．1.2%瓊脂（用生理鹽水配成）。
3．載玻片、毛細吸管、濕盒。
方法
1．制備瓊脂玻片 將已知加熱溶化的1.2%瓊脂3.5ml，迅速傾入載玻片上。
2．打孔 待凝固后用打孔器按下圖樣打孔。（孔徑3mm，孔距4mm）
3．加樣
以上方孔為第1孔，按順時針方向分別稱為2、3、4、5和6孔，孔為7孔。7孔加入抗AFP血清，1、4孔加入已知AFP陽性血清（或AFP），作為陽性對照孔；6孔加入已知AFP陰性血清，作為陰性對照孔，其余2、3、5孔為試驗孔，加入待檢血清。
4．溫育 置濕盒室溫或37℃溫育12-24 h。
結果觀察
1、4孔與7孔間應出現白色沉淀線（如上左圖1與7，4與7），6與7孔間應不出現白色沉淀線。若2、3、5孔與7孔間出現白色沉淀線而且與陽性對照沉淀線吻合者如圖中2、3、5與1、4孔間，即為實驗陽性，表明待檢血清中含有AFP（即AFP陽性）。如出現與陽性對照相連接，且呈槍刺狀如上右圖中4與5孔間，說明二者間有共同抗原成分；如出現成交叉的沉淀線如上右圖3與4，則是非特異性沉淀反應，為假陽性反應，乃判為實驗陰性，表明待檢血清為AFP陰性。
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