概述
臨床上的各種類型的免疫缺陷、自身免疫病以及腫瘤等疾病均可出現(xiàn)淋巴細(xì)胞或淋巴亞群的數(shù)量和功能的變化。因此用體外方法對機(jī)體具有免疫反應(yīng)的外周血淋巴細(xì)胞及其亞群的數(shù)目或比例以及它們所顯示的功能的強(qiáng)弱進(jìn)行檢測,是判斷機(jī)體細(xì)胞免疫水平的一種重要手段。這對于臨床認(rèn)識疾病、探討其發(fā)病機(jī)制、觀察病情變化、判斷預(yù)后、考核療效和防治疾病等方面均有重要意義。
*節(jié) 免疫細(xì)胞的分離
用體外方法對機(jī)體各種具有免疫反應(yīng)的細(xì)胞分別作鑒定、計(jì)數(shù)和功能測定,是觀察機(jī)體免疫狀態(tài)的一種重要手段。為此,須將各種參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞從血液中分離出來。參與免疫的細(xì)胞主要包括:淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等。
一、白細(xì)胞的分離
血液中紅細(xì)胞與白細(xì)胞比例約為600~1000:1,兩者的比重不同其沉降速度也不同,通常用兩種方法加以分離。
1、自然沉降法 外周血, 抗凝,靜置約一小時血液分為三層,上層為血漿,底層為紅細(xì)胞,緊貼紅細(xì)胞層上面的灰白層為WBC,輕輕吸取此層即可得到富含WBC懸液,低滲破壞RBC,洗滌即可。
2、聚合物加速沉淀法
常利用高分子量的聚合物如明膠、右旋糖酐等,將紅細(xì)胞快速沉降,從而分離出白細(xì)胞。本法的細(xì)胞獲得率比自然沉降法高。
二、外周血單個核細(xì)胞的分離
人血液中各種細(xì)胞的密度如下:
紅細(xì)胞:1.093
白細(xì)胞:1.092
淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞:1.075~1.090
血小板:1.030~1.035
單個核細(xì)胞包括:淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。
分離血細(xì)胞常用的分離劑為:Ficoll和Percoll分離劑
1、 Ficoll分層液
主要用于分離外周血中的單個核細(xì)胞,是一種單次密度梯度離心分離法。其主要成分為聚蔗糖(商品名為Ficoll )其密度為1.020。可將血液分成四層,從上到下依次是:血漿、單個核細(xì)胞、粒細(xì)胞和紅細(xì)胞。
2、Percoll分層液
是一種連續(xù)密度梯度離心分離法,其主要成分為:硅膠顆粒,其原液密度為:1.135。可將血液分成四層,從上到下依次是:死亡細(xì)胞和血小板、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞和紅細(xì)胞。