一、原理:蛋白質分子在一定的PH條件下,由于基團解離而帶有一定的電荷,在含有緩沖液的醋酸纖維薄膜上,受電場作用而以一定的速度向一定的方向移動。不同的蛋白質分子,由于所帶的電荷不同,移動的方向或速度不同,從而達到分離。
二、材料與試劑:電泳儀、醋酸纖維薄膜、PH8.6緩沖液(稱取10.30g1.84g,溶于1000ml蒸餾水中,或者稱取10.3g鈉,加1M鹽酸8ml,加蒸餾水至1000ml)、染色液(氨基黑10B1g溶于10ml冰醋酸與90ml甲醇的混合液中)、洗滌液(冰醋酸10ml加甲醇90ml,或者甲醇50ml,冰醋酸10ml,加蒸餾水40ml)、透明液(溶液,或用苯甲醇(折光率1.54),(折光率1.54)等溶液)、微量注射器、蛋白質樣品液
三、操作方法
1、醋酸纖維薄膜的準備:將醋酸纖維薄膜切成10×2.5cm的膜條,浸于緩沖液中約30min,充分浸透至無白點,取出用濾紙吸去多余的緩沖液。
2、點樣:用微量注射器將5ul蛋白質樣品點在薄膜條。
3、電泳:將薄膜條置于電泳儀的支架上,拉直膜條,兩端與濾紙條相接,將濾紙浸入到緩沖溶液中,緩沖液兩槽應在同一水平面上,加蓋密封,平衡10min。接通電源,以10-25V/cm的電場強度電泳0.5-1h。
4、顯色:電泳完畢后,取出濾紙條在氨基黑染色液中染色5-10min,然后用漂洗液洗4-5次,直至區帶清晰為止。