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士鋒生物實驗室如何測定維生素C的定量

時間:2013/9/30閱讀:574
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一、原理:維生素C具有化學還原性。2,6-二氯酚靛酚鈉鹽水溶液呈藍色,在酸性環境中為玫瑰色,當其被還原時,則脫色。根據其各自性質,利用2,6,-二氯酚靛酚在酸性環境中滴定有維生素C的樣品溶液。開始時,樣品液中的維生素C立即將滴入的2,6-二氯酚靛酚還原脫色,當樣品液中維生素全部被氧化時,再滴入2,6-二氯酚靛酚就不再被還原脫色而呈玫瑰色。故當樣品液用2,6-二氯酚靛酚標準液滴定時,溶液出現淺玫瑰色時表明樣品液中的維生素C全部被氧化,達到滴定終點。此時,記錄滴定所消耗的2,6-二氯酚靛酚標準量,按下述計算出樣品中還原型維生素C的含量。

二、材料與試劑

綠豆芽、10%鹽酸溶液

2,6-二氯酚靛酚溶液:稱取0.21g,0.26g2,6-二氯酚靛酚溶于250ml蒸餾水中,稀釋至1000ml。過濾,裝入棕色瓶內,置于冰箱中保存,不得超過3天。使用前用新配制的標準抗壞血酸溶液標定。取5ml標準抗壞血酸加入5ml偏磷酸-醋酸溶液。然后用2,6-二氯酚靛酚溶液的濃度,以每ml2,6-二氯酚靛酚溶液的濃度,以每毫升2,6-二氯酚靛酚溶液相當于抗壞血酸的mg數來表示。

標準抗壞血酸溶液:準確稱取純抗壞血酸結晶50mg溶于偏磷酸-醋酸溶液定容到250ml。裝入棕色瓶中,儲于冰箱內。

偏磷酸-醋酸溶液:稱取偏磷酸15g,溶于40ml冰醋酸和450ml蒸餾水所配的混合液中。過濾。儲于冰箱內,此液保存不得超過10天。

三、操作方法

1、制備含維生素C的樣品提取液:稱取30g綠豆芽置于研缽中研磨,放置片刻(約10分鐘),用2層紗布過濾,將濾液(如混濁可離心)濾入50ml容量瓶中。反復抽提2-3次,將濾液并入同一容量瓶中。zui后,用酸化的蒸餾水(每10ml蒸餾水加10%鹽酸1滴)定容,混勻,備用。

2、維生素C含量的測定:量取樣品提取液10ml于錐形瓶中。用微量滴定管,以2,6-二氯酚靛酚溶液滴定樣品提取液,呈微弱的玫瑰色,持續5秒鐘不褪為終點,記錄所用2,6-二氯酚靛酚的ml數。整個滴定過程不要超過2分鐘。另取10ml用10%鹽酸酸化的蒸餾水做空白對照滴定。樣品提取液和空白各做三份。

3、計算結果

維生素Cmg/100g樣品=((VA-VB)×S)/W×100

VA為滴定樣品提取液所用的2,6-二氯酚靛酚的平均ml數

VB為滴定空白對照所用的2,6-二氯酚靛酚的平均ml數

S為1ml2,6-二氯酚靛酚溶液相當于維生素C的mg數

W為10ml樣品提取液中含樣品的g數

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