【原理】

大分子顆粒性抗原（如細(xì)菌、紅細(xì)胞等）與其相應(yīng)的抗體相結(jié)合，在適量的電解質(zhì)存在及一定的溫度下，經(jīng)過一定的時(shí)間可出現(xiàn)肉眼可見的凝集團(tuán)塊，是為凝集反應(yīng)。

試管凝集實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用，一般均以標(biāo)準(zhǔn)抗原（已知抗原）測(cè)定免疫血清或患者血清中抗體的效價(jià)。

【材料】

1:10抗羊紅細(xì)胞免疫血清（配制前需經(jīng)56℃30分鐘滅活）

1%綿羊紅細(xì)胞生理鹽水懸液

生理鹽水

試管及1ml刻度吸管

試管架及吸液橡皮乳頭、紅蠟筆

恒溫箱

【方法】

1.取試管8支，排列于試管架上并做好標(biāo)記。

2.每管各加入生理鹽水0.5ml。

3.吸取1:10抗綿羊紅細(xì)胞免疫血清0.5ml加入第1管中并充分混勻。

4.自第1管中吸出0.5ml加入第2管中，經(jīng)充分混勻后吸出0.5ml加入第3管中，如此依次稀釋至第7管，混勻后吸出0.5ml棄去。此時(shí)1~7管所含免疫血清的稀釋度為1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640，1:1280第7管不加免疫血清做為對(duì)照。

5.1~8管每管各加1%綿羊紅細(xì)胞懸液各0.5ml。（注意：加入前必須將紅細(xì)胞懸液充分混勻）。

6.此時(shí)第1~7管的血清zui終稀釋度為1:40、1:80、1:160、1:320、1:640、1:1280、1:2560。

7.搖勻后，靜置于37℃下，1小時(shí)后觀察結(jié)果并寫出實(shí)驗(yàn)記錄。

【結(jié)果】

1.觀察前切勿搖動(dòng)試管，以免凝集分散。

2.首先應(yīng)觀察對(duì)照管，該管因無相對(duì)應(yīng)的免疫血清故不應(yīng)有凝集現(xiàn)象，血球應(yīng)全部沉于試管底部呈規(guī)則園盤狀。如出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則說明實(shí)驗(yàn)操作有誤或血球本身有自凝現(xiàn)象，試驗(yàn)結(jié)果不能成立。

3.再觀察1~6試驗(yàn)管，并以++++、+++、++、+，分別表示凝集強(qiáng)度，不凝集者記以“―”。

++++：*凝集，呈厚膜狀鋪于管底，邊緣呈鋸齒狀。

+++：血球呈薄層貼于管底，邊緣不齊。

++：呈較小園盤狀沉淀，邊緣凝集呈顆粒狀。

+：血球呈較大的園盤狀沉淀，邊緣有少量凝集顆粒。

―：無凝集，血球沉于管底園盤狀。

4.以血清zui高稀釋度仍能出現(xiàn)“++”凝集現(xiàn)象者，作為該免疫血清的效價(jià)（滴度）。例如，在本次實(shí)驗(yàn)中第5管（1:640）呈“++”凝集，第6管（1:1280）呈“+”凝集或“―”，對(duì)照管為“―”，則該血清的效價(jià)為1:640。

注：

1.免疫血清在實(shí)驗(yàn)前須經(jīng)56℃30分鐘滅活，是指對(duì)免疫血清中所含補(bǔ)體活性的滅活，如不滅活處理則直接影響凝集結(jié)果，例如在本次實(shí)驗(yàn)中高濃度的免疫血清可使血球出現(xiàn)溶解現(xiàn)象。

2.本次實(shí)驗(yàn)對(duì)凝集反應(yīng)判讀結(jié)果的方法，僅屬對(duì)紅細(xì)胞凝集的判讀，而對(duì)其它顆粒性抗原（如細(xì)菌菌體抗原）在凝集反應(yīng)中判讀結(jié)果的方法則在微生物學(xué)實(shí)習(xí)指導(dǎo)中另有說明。

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