明膠酶譜法被廣泛地用于明膠酶A(MMP-2)和明膠酶B(MMP-9)的測定,由于有活性的酶和無活性的酶原存在分子量的差別,明膠酶譜法可有效分離有活性的酶和無活性的酶原。而且能分離緊密結合在具有活性的酶上的內源性組織抑制劑(TIMPs)。在此基礎上發展了反明膠酶譜法和原位明膠酶譜法等,分別用于測定明膠酶的抑制劑和細胞與組織中明膠酶的定位。
實驗材料細胞勻漿組織提取物
試劑、試劑盒聚丙烯酰胺凝膠明膠濃縮膠Tris-*緩沖液Triton X-100過硫酸銨甲醇醋酸考馬斯亮藍蛋白質上樣緩沖液
儀器、耗材電泳糟凝膠成像儀
實驗步驟在整個測定過程中,要避免可抑制酶活性的成分污染;Triton X-100洗滌過程要充分,這對恢復酶的活性十分重要。如果要提高測定的靈敏度,可適當增加孵育時間。
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