MycoLight 熒光CTC活細(xì)菌定量試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測細(xì)菌的試劑盒，CTC流式細(xì)胞術(shù)活菌分析試劑盒提供了一種簡便的方法，可根據(jù)呼吸活動(dòng)評(píng)估細(xì)菌的健康和活力。 CTC本身是非熒光的，一旦被活細(xì)菌細(xì)胞表面的電子轉(zhuǎn)移系統(tǒng)還原，就會(huì)形成紅色和不溶性熒光CTC甲maz，可以用流式細(xì)胞儀檢測到。 不能呼吸的死細(xì)菌或以較低頻率呼吸的不健康細(xì)菌將不產(chǎn)生或產(chǎn)生很少的帶有CTC染色的紅色熒光，因此可對(duì)細(xì)菌種群的健康狀況進(jìn)行半定量測量。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的MycoLight 熒光CTC活細(xì)菌定量試劑盒。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1.準(zhǔn)備10倍染料儲(chǔ)備液
2.準(zhǔn)備細(xì)菌樣本
3.將細(xì)菌樣品與CTC在37°C孵育30分鐘
4.PE-Texas Red通道通過流式細(xì)胞儀分析樣品

溶液配制

1.儲(chǔ)備溶液配制

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. CTC儲(chǔ)備溶液（10倍）：
將1 mL蒸餾水加到CTC（組分A）小瓶中，制成10X儲(chǔ)備液。 注意：原液在-20°C穩(wěn)定2周。 避光。

操作步驟

1.準(zhǔn)備細(xì)菌樣品，濃度為106細(xì)胞/ ml。在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中使細(xì)菌生長到對(duì)數(shù)后期。通過以10,000 x g離心10分鐘除去培養(yǎng)基，然后將沉淀重懸于適量的PBS中。注意：在波長= 600 nm（OD600）處測量細(xì)菌培養(yǎng)物的光密度，以確定細(xì)胞數(shù)。對(duì)于大腸桿菌培養(yǎng)，OD600 = 1.0等于8 x 108細(xì)胞/ ml。

2.根據(jù)需要用測試化合物處理細(xì)胞。通過以10,000 x g離心10分鐘來去除處理液，然后將沉淀物重新懸浮在適量的測定緩沖液（組分B）中，以使處理后樣品中的細(xì)菌濃度與活菌濃度相同。注意：開始治療之前，請(qǐng)確定細(xì)菌培養(yǎng)物的濃度。注意：死細(xì)菌可以作為陰性對(duì)照。建議用70％乙醇?xì)⑺兰?xì)菌30分鐘，然后煮沸60分鐘。

3.將10 µL 10X CTC儲(chǔ)備溶液加到90 µL細(xì)菌樣品中。

4.充分混合，然后在黑暗中于37°C孵育30分鐘。

5.在使用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞之前，添加400 µL分析緩沖液（組分B）以增加體積。

6.用流式細(xì)胞儀通過PE-Taxes Red通道（Ex / Em = 488/615 nm）監(jiān)測細(xì)菌的熒光。注意：要排除雜物，建議將流式細(xì)胞儀的閾值設(shè)置為以下值：FSC> 10,000，SSC> 5,000。注意：CTC的效率高度依賴菌株，因此會(huì)相應(yīng)優(yōu)化染色條件。