樣品實驗方案

簡要概述

1.在HHBS中制備樣品（0.5 mL /測定）
2.替換為HHBS
3.將Stain It 反應(yīng)性染料添加到細胞懸液中
4.在室溫或37°C下將細胞染色20-60分鐘
5.清洗細胞
6.修復(fù)細胞（可選）
7.使用適當?shù)募ぐl(fā)/發(fā)射濾光片，用流式細胞儀和/或熒光顯微鏡檢查樣品

溶液配制

1.儲備溶液配制

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 Stain It 活性染料原液（500X）：
將200 µL DMSO（組分B）添加到Stain It 反應(yīng)性染料（組分A）的小瓶中，以得到500X Stain It 反應(yīng)性染料儲備液。

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樣品示例及操作

1.使用1X Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的無疊D化鈉和無血清/蛋白質(zhì)的緩沖液制備細胞。

2.用HHBS或您選擇的無疊氮化物和無血清/蛋白質(zhì)的緩沖液洗滌細胞一次。

3.以5-10×106 / mL的濃度在HHBS或您選擇的無疊氮化物和無血清/蛋白質(zhì)的緩沖液中重懸細胞。

4.將1 µL 500X Stain It 活性染料儲備液添加到0.5 mL細胞/測定中，并充分混合。

5.在室溫或37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中避光保存20-60分鐘。 注意：應(yīng)根據(jù)不同細胞系實驗確定的染色濃度和孵育時間。

6.洗滌細胞兩次，然后用HHBS或您選擇的緩沖液重懸細胞。

7.根據(jù)需要固定細胞（可選）。

8.使用適當?shù)募ぐl(fā)/發(fā)射濾光片，使用流式細胞儀和/或熒光顯微鏡分析細胞。