樣品實驗方案

簡要概述

1. 加入相同體積的CytoCalcein™Violet 450，AM工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）

2. 監測Ex / Em = 405/460 nm（截止= 435 nm）的熒光強度（底部讀取模式）

溶液配制

儲備溶液配制

CytoCalcein™Violet 450，AM儲備溶液：

將20 µL DMSO（組分B）添加到CytoCalcein™Violet 450，AM（組分A）的小瓶中，并充分混合以制成CytoCalcein™Violet 450，AM儲備溶液。注意：20 µL CytoCalcein™Violet 450，AM儲備液足以裝滿一塊板。避光。為了存放，請將管子緊緊密封。

工作溶液配制

將CytoCalcein™Violet 450，AM儲備溶液的全部內容物（20 µL）加入10 mL的測定緩沖液（組分C）中，并充分混合以制成CytoCalcein™Violet 450，AM工作溶液。該CytoCalcein™Violet 450，AM工作溶液在室溫下至少可穩定2小時。注意：如果諸如CHO細胞之類的細胞含有能促進熒光染料隨時間滲漏的有機陰離子轉運蛋白，則應制備丙*舒儲備溶液并以孔內工作濃度范圍為1至1的濃度添加到上樣緩沖液中。 2.5毫米 分裝并保存未使用的丙*舒儲備溶液于≤-20°C。

操作步驟

1. 根據需要用測試化合物處理細胞。注意：添加化合物之前不必洗滌細胞。但是，如果測試的化合物對血清敏感，則可以在添加化合物之前將生長培養基和血清因子吸掉。加入100 µL /孔（96孔板）和25 µL /孔（384孔板）的1X Hank鹽溶液和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或抽吸后選擇的緩沖液。或者，細胞可以在無血清培養基中生長。

2. 加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的CytoCalcein™Violet 450，AM工作溶液。

3. 在避光的條件下，于室溫或37°C下孵育平板1小時。（孵育時間可能是15分鐘到過夜。孵育時間少于4小時，我們獲得了結果）。 注意：適當的孵育時間取決于所用的單個細胞類型和細胞濃度。優化每個實驗的孵育時間。 注意： 加載后請勿洗滌細胞。 注意： 對于非貼壁細胞，建議在孵育后以800 rpm的速度離心細胞板2分鐘，然后制動。

4. 使用熒光板讀數器（底部讀取模式）在Ex / Em = 405/460 nm（截止= 435 nm）下監控熒光強度。