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Ex?(nm)	498	Em?(nm)	522

Cell Meter TUNEL凋亡檢測試劑盒 DN段化代表晚期細胞凋亡的特征。凋亡細胞中的DNA斷裂可以通過末端脫氧核苷酸轉移酶（TdT）介導的dUTP缺口末端標記（TUNEL）檢測。 TUNEL測定法依賴于DNA中存在的缺口，該缺口可通過TdT進行鑒定，TdT是一種酶，該酶催化添加標記物的dUTP。現有的所有TUNEL分析均包含劇毒的甲胂酸鈉，這可能會誘導細胞凋亡并降低DNA的產生和DNA鏈。我們的Cell Meter TUNEL細胞凋亡測定試劑盒使用了不含甲胂酸鈉的專有緩沖系統。該試劑盒基于將我們專有的熒光染料摻入凋亡過程中形成的DN段中。該測定法經過優化，可直接檢測分離的或貼壁細胞中的細胞凋亡，而無需使用任何抗體。該試劑盒為所有必需成分提供了優化的測定方案。適用于熒光酶標儀，熒光顯微鏡或流式細胞儀。在流行的FITC通道上可以輕松檢測到其信號。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的Cell Meter TUNEL凋亡檢測試劑盒。

樣品實驗方案

簡要概述

用測試化合物準備細胞。
與TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分鐘至1小時。
洗滌細胞。
用4％甲醛（可選）固定細胞。
用帶FITC濾光片的熒光顯微鏡或帶FITC通道的流式細胞儀。讀取Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）處的熒光強度。

溶液配制

工作溶液配制

將0.5μL的100X Tunnelyte Green（組分A）添加到50μL的反應緩沖液（組分B）中，使總體積為50.5μL的TUNEL工作溶液。避光。注意：應單獨評估每個細胞系，以確定細胞密度。

實驗步驟

1.根據您的特定協議，將細胞培養至密度以誘導凋亡。對于在96孔板培養物中生長的貼壁細胞，我們建議大約30,000至50,000個細胞/孔，對于非貼壁細胞，建議大約1至2 x 106細胞/ mL。同時，在每種標記條件下，用誘導群體相同的密度培養非誘導陰性對照細胞群體。注意：我們用100 nM-1 µM星形孢菌素處理HeLa細胞4小時，以誘導細胞凋亡。

2.染色和固色：

2.1取出細胞培養基。
2.2向每個樣品中添加50µL TUNEL工作溶液。
2.3在37°C下孵育30-60分鐘。
2.4除去TUNEL工作溶液，并用200 µL /孔的PBS洗滌細胞1-2次。
2.5向每個樣品中添加100uL反應緩沖液（組分B）。
2.6使用Ex / Em = 490/525 nm（cut off= 515 nm）的熒光酶標儀，帶有FITC濾光片組的熒光顯微鏡或帶有FITC通道的流式細胞儀檢測熒光強度。
2.7可選：從步驟5中移出反應緩沖液，并向每個孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4％甲醛固定緩沖液（未提供）。注意：對于非貼壁細胞，請添加所需量（例如2X106細胞/ mL）的4％甲醛固定液。
2.8在室溫下將平板孵育20至30分鐘。
2.9去除固定劑。
2.10用PBS洗滌細胞2-3次，并用100µL PBS /孔/ 96孔板替換。
2.11使用Ex / Em = 490/525 nm（cut off= 515 nm）的熒光酶標儀，帶有FITC濾光片組的熒光顯微鏡或帶有FITC通道的流式細胞儀檢測熒光強度。
2.12可選：用1X Hoechst（組分C）在Ex / Em = 350/460 nm處染色細胞核，以進行圖像分析

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