張經理
當前位置:西安百螢生物科技有限公司>>trFluor™ 染料和試劑盒>>檢測試劑盒>> 22835Cell Meter 磷脂酰*細胞凋亡檢測試劑盒
我們的Cell Meter 磷脂酰*細胞凋亡檢測試劑盒 是一套用于檢測細胞生存力的工具。有多種參數可用于監測細胞活力。該特定試劑盒旨在通過測量磷脂酰*(PS)的轉運來檢測細胞凋亡。在細胞凋亡中,PS轉移到質膜的外部小葉。磷脂酰*在細胞表面的出現是細胞凋亡初始/中間階段的普遍指標,可以在觀察形態變化之前進行檢測。該試劑盒中使用的我們專有的Apopxin PS指示劑是基于小分子的PS指示劑。 PS指示劑與膜PS結合后具有藍色熒光。試劑盒中使用的PS染料具有與PacificBlue®(PacificBlue®是Invitrogen的商標)相似的光譜特性。藍色熒光染料在405nm處被紫色激發光充分激發,并在?450 nm處發出強烈的藍色熒光。該試劑盒經過優化,可與配備了紫色激發光的流式細胞儀一起使用。它特別適用于細胞的多色流式細胞術分析。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供的Cell Meter 磷脂酰*細胞凋亡檢測試劑盒。
樣品實驗方案
簡要概述
用測試化合物制備細胞(200 µL /樣品)
添加Apopxin 紫色450分析溶液
在室溫下孵育30至60分鐘
使用帶有450/40 nm濾光片(Pacific Blue通道)的流式細胞儀或帶有紫色濾光片的熒光顯微鏡分析細胞
實驗步驟
1.用Apopxin 紫色450準備和孵育細胞:
1.1用測試化合物處理細胞一段時間(對于用星形孢菌素處理過的Jurkat細胞,需要4-6小時)以誘導細胞凋亡。
1.2離心細胞以獲得1-5×105細胞/管。
1.3將細胞重懸于200 µL分析緩沖液(組分B)中。
1.4向細胞中加入2 µL Apopxin 紫色450(組分A)。
1.5可選:向壞死細胞中加入2 µL 100X碘化丙啶(組分C)。
1.6避光保存,于室溫下孵育30至60分鐘。
1.7在使用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析細胞之前,添加300 µL分析緩沖液(組分B)以增加體積。
1.8使用帶有450/40 nm濾光片的流式細胞儀(Pacific Blue通道)或帶有紫色濾光片的熒光顯微鏡檢測熒光強度。
2.通過使用流式細胞儀進行分析:
2.1使用帶有450/40 nm濾光片(Pacific Blue通道)的流式細胞儀定量Apopxin Violet 450結合物。 將碘化丙錠加入細胞后,使用610/20 nm濾光片(PE-Texas Red通道)測量細胞活力。 注意:由于對細胞的分離或收獲過程中可能會發生特定的膜損傷,因此不對貼壁細胞的Apopxin 結合流式細胞術進行常規測試。
3.通過使用熒光顯微鏡進行分析:
3.1孵育后用移液管吸移細胞懸液,用測定緩沖液沖洗1-2次,然后用測定緩沖液重懸細胞。
3.2將細胞添加到載玻片上。 注意:對于貼壁細胞,建議直接在蓋玻片上生長細胞。 與Apopxin Violet 450孵育后,用Assay Buffer沖洗1-2次,然后將Assay Buffer加到蓋玻片上。 將玻片上的蓋玻片倒置并可視化細胞。 與Apopxin Violet 450孵育后,還可以將細胞固定在2%甲醛中,并在顯微鏡下觀察。
3.3在帶有紫色濾光片的熒光顯微鏡下,用Apopxin 紫色450分析凋亡細胞。 當碘化丙啶添加到細胞中時,使用TRITC濾波片檢測細胞活力。 質膜上的藍色染色表明Apopxin Violet 450與細胞表面的PS結合。
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