樣品實驗方案

簡要概述

1. 用5×105至1×106細胞/ mL的密度制備含測試化合物的細胞

2. 將0.5 µL細胞溶液中加入1 µL 500X TF5-VAD-FMK

3. 將細胞在37°C，5％CO2培養箱中孵育1-4小時

4. 沉淀細胞并將細胞重懸于0.5 mL檢測緩沖液或生長培養基中

5. 使用帶有660/20 nm濾光片的流式細胞儀分析細胞（APC通道）

實驗步驟

1.對于每個樣品，在0.5mL溫熱培養基或自備緩沖液中以5×105至1×106cell/ mL的密度制備細胞。注意：應單獨評估每種細胞系，以確定誘導凋亡的細胞密度。

2.用測試化合物處理細胞一段時間，以誘導細胞凋亡，并建立陽性和陰性對照。

3.向處理過的細胞中加入1µL 500X TF5-VAD-FMK（組分A）。

4.將細胞在37°C，5％CO2培養箱中孵育1-4小時。注意：對于貼壁細胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細胞以保持細胞完整，并在與TF5-VAD-FMK孵育之前用含血清的培養基洗滌細胞一次。合適的孵育時間取決于所用的單個細胞類型和細胞濃度。優化每個實驗的孵育時間。

5.洗滌并旋轉細胞兩次。將細胞重懸于0.5 mL分析緩沖液（組分B）或生長培養基中。注意：TF5-VAD-FMK是熒光的；因此，重要的是洗凈任何未結合的試劑以除去背景。

6.可選：用DNA染色劑標記細胞（例如綠色DCS標記死細胞，可以用530/30 nm濾光片（FITC通道）檢測到。

7.可選：修復細胞。

8.使用帶有660/20 nm濾光片（APC通道）的流式細胞儀檢測熒光強度。