樣本實驗方案

簡要概述

1.用測試化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制備細胞
2.加入等體積的Caspase 8工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）
3.在室溫下孵育1小時
4.在Ex / Em = 535/620 nm（截止= 610 nm）監測熒光強度（頂部或底部讀取模式）

工作溶液配制

將5μL的200X Ac-LEHD-ProRed 儲備溶液（組分A）加入1mL的分析緩沖液（組分B）中并充分混合以制備Caspase 9工作溶液。 避光。 注意：Caspase 9工作液不穩定，請及時使用。 1 mL Caspase 9工作溶液足以進行10次分析。有關細胞樣品制備的指南，請點擊查看。

操作步驟

1.通過將10μL/孔的10X測試化合物（96孔板）或5μL/孔的5X測試化合物（384-板）加入PBS或所需緩沖液中來處理細胞。對于空白孔（沒有細胞的培養基），加入相同量的化合物緩沖液。

2.將細胞板在37℃，5％CO2，培養箱中孵育所需的一段時間（對于用星形孢菌素處理的Jurkat細胞3-4小時）以誘導細胞凋亡。

3.添加100μL/孔/ 96孔或25μL/孔/ 384孔板的Caspase 9工作溶液。

4.將板在室溫下孵育至少1小時，避光。注意：如果需要，在室溫下加入Caspase 9工作溶液10分鐘前，向選定的樣品中加入1μL的1 mM Ac-LEHD-CHO caspase 9抑制劑，以確認抑制caspase 9樣活性。

5.在Ex / Em = 540 / 620nm（cutoff= 610nm）下用熒光酶標儀（頂部或底部讀取模式）監測熒光強度。注意：有時，底部讀數會提供更好的信號背景比。如果使用底部讀取模式，則以800rpm離心細胞板（特別是對于非貼壁細胞）2分鐘 。