樣品實驗方案

簡要概述

1. 用5×105至1×106細胞/ mL的密度制備含測試化合物的細胞

2. 在0.5 mL細胞溶液中加入1 µL 500X MitoTell Red

3. 將細胞在37°C，5％CO2培養箱中孵育15-30分鐘

4. 沉淀細胞，然后將細胞重懸于0.5 mL檢測緩沖液中

5. 使用帶有APC或Cy5通道的流式細胞儀分析細胞

實驗步驟

1.對于每個樣品，在0.5 mL溫暖的培養基或自備的緩沖液中以5×105至1×106細胞/ mL的密度制備細胞。注意：應單獨評估每種細胞系，以確定誘導凋亡的細胞密度。

2.用測試化合物處理細胞一段時間，以誘導細胞凋亡，并建立平行對照實驗。注意：我們在37oC下用20µM CCCP處理Jurkat細胞15分鐘，以改變線粒體膜電位。CCCP或FCCP可以與MitoTell Red同時添加。為了獲得結果，可能需要為每個單獨的細胞系滴定CCCP或FCCP。

3.向處理過的細胞中加入1 µL 500X MitoTell Red（組分A）。

4.將細胞在37°C，5％CO2培養箱中孵育15至30分鐘。注意：對于貼壁細胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細胞以保持細胞完整，并在與MitoTell Red孵育之前用含血清的培養基洗滌細胞一次。

5.以800 rpm的速度離心細胞4分鐘，然后將細胞重懸于0.5 mL的測定緩沖液（組分B）或自備的緩沖液中。

6.使用流式細胞儀通過APC或Cy5通道檢測熒光強度。