張經(jīng)理
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當(dāng)前位置:西安百螢生物科技有限公司>>trFluor™ 染料和試劑盒>>檢測試劑盒>> 22805Cell Meter 線粒體膜電位檢測試劑盒
參 考 價 | 面議 |
產(chǎn)品型號22805
品 牌AAT Bioquest
廠商性質(zhì)代理商
所 在 地西安市
更新時間:2024-01-31 10:23:06瀏覽次數(shù):148次
聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線張經(jīng)理
我們的Cell Meter 線粒體膜電位檢測試劑盒 是一套用于檢測細(xì)胞功能的工具。可以使用多種參數(shù)。該特定試劑盒旨在通過測量線粒體膜電位(MMP)的丟失來檢測細(xì)胞凋亡。線粒體膜電位的凋亡與線粒體通透性過渡孔的開放相吻合,導(dǎo)致*釋放到細(xì)胞質(zhì)中,進(jìn)而觸發(fā)凋亡級聯(lián)反應(yīng)中的其他下游事件。該熒光測定法使用我們專有的陽離子MitoLite Orange檢測細(xì)胞中線粒體膜電位的變化。在正常細(xì)胞中,當(dāng)線粒體中積累了MitoLite Orange時,橙色熒光強(qiáng)度會增加。但是,在凋亡細(xì)胞中,MMP凋亡后,MitoLite Orange的熒光強(qiáng)度降低。可以對用MitoLite Orange染色的細(xì)胞進(jìn)行熒光檢測。我們的Cell Meter 橙色線粒體膜電位測定試劑盒可通過優(yōu)化的測定方法提供所有必需成分。該試劑盒可用于篩選凋亡激活劑和抑制劑。而且該測定可以以方便的96孔和384孔熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測,而無需清洗步驟。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供的Cell Meter 線粒體膜電位檢測試劑盒。
樣品實驗方案
簡要概述
準(zhǔn)備細(xì)胞
添加測試化合物
添加MitoTell Orange工作溶液(100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板)
將板在5%CO2、37°C的培養(yǎng)箱中孵育15-30分鐘
添加測定緩沖液B(50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板)
檢測Ex / Em = 540/590 nm(截止= 570 nm)的熒光增加(底部讀取模式)
溶液配制
工作溶液配制
將50 µL的200X MitoTell 橙色(組分A)添加到10 mL的測定緩沖液A(組分B)中,并充分混合以制成MitoTell Orange工作溶液,避光。
實驗步驟
1.用測試化合物處理細(xì)胞一段時間,以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并建立平行對照實驗。
陰性對照:僅用載體處理細(xì)胞。
陽性對照:在37°C 5%CO2培養(yǎng)箱中,以5-50 µM的濃度用FCCP或CCCP處理細(xì)胞15至30分鐘。 注意:CCCP或FCCP可以與MitoTell Orange同時添加。 為了獲得結(jié)果,可能需要為每個單獨的細(xì)胞系滴定CCCP或FCCP。
2.取出細(xì)胞培養(yǎng)基。注意:在添加MitoTell Orange工作溶液之前,必須除去細(xì)胞培養(yǎng)基。
3.將100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板的MitoTell Orange工作溶液添加到細(xì)胞板中。
4.將板在5%CO2、37°C的培養(yǎng)箱中避光放置15-30分鐘。注意:適當(dāng)?shù)姆跤龝r間取決于所用的單個細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。
5.將50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板的測定緩沖液B(組分C)添加到細(xì)胞板中。注意:加載后請勿洗滌細(xì)胞。對于非貼壁細(xì)胞,建議在加入測定緩沖液B(組分C)后,以800 rpm離心細(xì)胞板2分鐘,然后制動。
6.在加入分析緩沖液B(成分C)10至30分鐘后,使用熒光酶標(biāo)儀(底部讀取模式)在Ex/Em=640/680 nm(截止=665 nm)處檢測熒光強(qiáng)度,可以使用終點模式,也可以使用動力學(xué)模式。
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