樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.用測(cè)試化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制備細(xì)胞
2.加入等體積的Caspase 8工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）
3.在室溫下孵育30分鐘至1小時(shí)
4.監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490/525 nm處的熒光增加（截止= 515 nm）

工作溶液配制

將50μLCaspase8底物（組分A）加入10mL測(cè)定緩沖液（組分B）中并充分混合以制備Caspase 8工作溶液。 避光。 注意：Caspasae 8工作液不穩(wěn)定，請(qǐng)及時(shí)使用。有關(guān)細(xì)胞樣品制備的指南，請(qǐng)點(diǎn)擊查看。

操作步驟

1.通過(guò)將10μL/孔的10X測(cè)試化合物（96孔板）或5μL/孔的5X測(cè)試化合物（384孔板）加入PBS或所需緩沖液中來(lái)處理細(xì)胞。對(duì)于空白孔（沒(méi)有細(xì)胞的培養(yǎng)基），加入相同量的化合物緩沖液。

2.將細(xì)胞板在5％CO 2,37℃培養(yǎng)箱中孵育所需的一段時(shí)間（對(duì)于用喜*堿或星形孢菌素處理的Jurkat細(xì)胞，4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 8工作溶液。

4.將板在室溫下孵育30分鐘至1小時(shí)，避光。注意：如果需要，在室溫下加入Caspase 8工作溶液10分鐘前，向選定的樣品中加入1μL的1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制劑，以確認(rèn)對(duì)caspase 8樣活性的抑制作用。

5.以800rpm離心細(xì)胞板（特別是對(duì)于非貼壁細(xì)胞）2分鐘（制動(dòng)關(guān)閉）。

6.用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下監(jiān)測(cè)熒光增加。