樣品實驗方案

簡要概述

準備膽*醇檢測工作溶液（50μL）
添加膽*醇標準品和/或測試樣品（50μL）
在37°C孵育30分鐘
在Ex / Em = 540 / 590nm處監測熒光強度

溶液配制

1.儲備溶液配制

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環。
1.1 Amplite 紅色儲備液（250X）：
將40μLDMSO（組分E）加入到Amplite Red底物（組分A）的小瓶中。應立即使用原液。任何剩余的溶液應等分并在-20℃重新冷凍。注意：避免反復凍融循環。注意：在硫醇如二硫蘇糖醇（DTT）和2-巰*乙醇存在下，Amplite Red底物不穩定。反應中DTT或2-巰*乙醇的濃度應不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不穩定。因此，反應應在pH 7-8下進行。建議使用提供的分析緩沖液（pH 7.4）。

1.2膽*醇標準儲備液（20μM）：
將10μL膽*醇標準品（組分D）加入990μL測定緩沖液（組分B）中并充分混合。

2.標準溶液配制

2.1膽*醇標準溶液配制
準備膽*醇標準品（20μM）。 然后在測定緩沖液（組分B）中進行1：3連續稀釋，得到約10,3,1,0.3,0.1,0.03和0.01μM系列稀釋的膽*醇標準品。 包括非膽*醇緩沖液對照作為空白對照。

3.工作溶液配制

膽*醇工作溶液配制：
將5mL測定緩沖液（組分B）加入膽*醇酶混合物（組分C）的瓶中，并充分混合。 在膽*醇酶混合瓶中加入20μLDipiteRed 儲備液（250X）。