樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.準(zhǔn)備ACh工作溶液（50μL）
2.添加ACh標(biāo)準(zhǔn)品或ACh測(cè)試樣品（50μL）
3.在室溫下孵育10-30分鐘
4.監(jiān)測(cè)Ex / Em = 540/590 nm處的熒光強(qiáng)度（截止= 570 nm）

溶液制備

1.儲(chǔ)備溶液

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1. Amplite 紅色儲(chǔ)備液（250X）：
將40μLDMSO（組分E）加入到Amplite Red（組分A）的小瓶中以制備250X Amplite Red原液。

2.乙酰*堿標(biāo)準(zhǔn)溶液（50 mM）：
將200μLddH2O加入到乙酰*堿標(biāo)準(zhǔn)品（組分C）的小瓶中以制備50mM乙酰*堿標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

乙酰*堿標(biāo)準(zhǔn)
將20μL50mM乙酰8堿標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到980μL測(cè)定緩沖液（組分D）中以產(chǎn)生1000μM乙酰*堿標(biāo)準(zhǔn)溶液。 取1000μM乙酰*堿標(biāo)準(zhǔn)品，在分析緩沖液（組分D）中進(jìn)行1:10，得到100μM乙酰*堿標(biāo)準(zhǔn)品（AS7）。 取100μM乙酰*堿標(biāo)準(zhǔn)品（AS7）和1：3連續(xù)稀釋液，用分析緩沖液（組分D）連續(xù)稀釋乙酰*堿標(biāo)準(zhǔn)品（AS6-AS1）。 注意：稀釋的乙酰*堿標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

3.工作溶液

1.將5mL測(cè)定緩沖液（組分D）加入乙酰*堿探針（組分B）瓶中并充分混合。

2.將20μL250XAmplite Red 儲(chǔ)備溶液加入乙酰*堿探針溶液瓶中，制成乙酰*堿（ACh）工作溶液。 注意：應(yīng)立即使用乙酰*堿（ACh）工作溶液并避光。 測(cè)定背景將隨著更長(zhǎng)的儲(chǔ)存時(shí)間而增加。