操作步驟

簡要概述

準(zhǔn)備焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品和/或測試樣品（50μL）
加入焦磷酸鹽工作溶液（50μL）
在室溫下孵育10至30分鐘
監(jiān)測Ex / Em = 316/456 nm處的熒光強度（截止= 420 nm）

溶液制備

1.制備儲存溶液

       除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 PPi探針儲備溶液（200X）：
將50μLDMSO（組分D）加入到PPi探針（組分B）的小瓶中以制備200X PPi探針儲備溶液。 避光。 注意：對于一個96孔板，25μLPPi探針儲備溶液就足夠了。

1.2焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 mM）：
將10μL50mM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（組分C）加入490μLddH2 O或50mM Hepes緩沖液（pH 7）中，制成1mM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.制備標(biāo)準(zhǔn)溶液

焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液制備
將50μL的1mM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到450μLDdH2O或50mM Hepes緩沖液中，得到100μM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液（PS7）。 取100μM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液，在ddH2O或50mM Hepes緩沖液中進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到連續(xù)稀釋的焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（PS6-PS1）。

3.制備工作溶液

將25μL的200X PPi Sensor儲備溶液加入到5 mL的分析緩沖液（組分A）中并充分混合以制備PPi工作溶液。 注意：由于該檢測方法對PPi具有高靈敏度，因此使用不含PPi的實驗室器具和試劑非常重要。 DTT≥1mM會增加背景，MgCl2≥2mM會降低反應(yīng)。