樣品實驗方案

簡要概述

1.運行激酶反應(yīng)（20 µL）
2.添加ADP傳感器緩沖液（20 µL）
3.添加ADP傳感器（10 µL）
4.在室溫下孵育15分鐘-1小時
5.監(jiān)控?zé)晒鈴姸?/span>

溶液制備

1.標(biāo)準(zhǔn)溶液

磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)
向950μL去離子水或酶反應(yīng)緩沖液中添加50μL1 mM KH2PO4（組分D），得到50μM磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液（PS7）。 取50μM磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液，并進行1：2連續(xù)稀釋，以用去離子水或酶反應(yīng)緩沖液連續(xù)稀釋磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)液（PS6-PS1）。

2.工作溶液

2.1將500 µL ddH2O加入小瓶MESG底物（組分B）。 渦旋混合均勻，得到MESG底物溶液。 注意：250 µl足夠一塊板。

2.2向小瓶嘌呤核苷磷酸化酶（PNP；組分C）中加入100 µL ddH2O。 渦旋混合均勻，得到嘌呤核苷磷酸化酶溶液。

2.3將全部體積的MESG底物溶液和嘌呤核苷磷酸化酶溶液添加到分析緩沖液（組分A）的瓶子中，并充分混合以得到工作溶液。 將工作溶液放在冰上。 注意：此工作溶液在冰上至少可穩(wěn)定4小時。 不建議將工作溶液冷凍進行其他測定。 為了獲得理想的結(jié)果，需要紫外線透明的板或比色皿。 由于該測定法對Pi的敏感性很高，因此使用無Pi的實驗室器具極為重要。