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Amplite 馬來(lái)酰亞胺定量試劑盒(熒光法)綠色熒光是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于胺定量的試劑盒，具有馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)的各種交聯(lián)劑廣泛用于將蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)交聯(lián)至其他生物分子。很少有試劑或檢測(cè)試劑盒可用于定量引入種蛋白質(zhì)的馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)的數(shù)量。所有市場(chǎng)出售的試劑盒都有繁瑣的操作。我們的試劑盒使用專有染料，與馬來(lái)酰亞胺反應(yīng)后熒光增強(qiáng)。該試劑盒提供靈敏的一步熒光測(cè)定方法，可在100μL測(cè)定體積（濃度100 nM）下檢測(cè)少至10皮摩爾的馬來(lái)酰亞胺。該測(cè)定快速穩(wěn)定。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，并且易于適應(yīng)自動(dòng)化。該試劑盒提供了所有必需試劑的便捷方案。為了快速定量蛋白質(zhì)馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)，我們建議您使用＃5526。對(duì)于納米粒子馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)的定量，我們建議您使用＃5525。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的Amplite 馬來(lái)酰亞胺定量試劑盒(熒光法)。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.準(zhǔn)備20X馬來(lái)酰亞胺反應(yīng)混合物（260μL）
2.在室溫下孵育30-60分鐘
3.準(zhǔn)備馬來(lái)酰亞胺工作溶液（50μL）
4.添加N-乙基馬來(lái)酰亞胺標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50μL）
5.在室溫下孵育5至30分鐘
6.監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490/525 nm處的熒光增加（截止= 515 nm）

溶液配制

1.儲(chǔ)備溶液配制

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1.1馬來(lái)酰亞胺Green 原液（500X）：
將20μLDMSO（組分E）加入到馬來(lái)酰亞胺Green（組分A）的小瓶中以制備500X馬來(lái)酰亞胺Green 儲(chǔ)備溶液。注意：10μL的500X馬來(lái)酰亞胺Green 原液足以容納一個(gè)96孔板。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

點(diǎn)擊查看N-乙基酰亞胺標(biāo)準(zhǔn)溶液配制方案
將10μL10mM（10nmol /μL）N-乙基馬來(lái)酰亞胺標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）加入990μL測(cè)定緩沖液（組分C）中以產(chǎn)生100μM（100pmol /μL）N-乙基馬來(lái)酰亞胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（MS7）。取100μM（10pmol /μL）N-乙基酰亞胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（MS7）并進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到用測(cè)定緩沖液（組分C）連續(xù)稀釋的N-乙基馬來(lái)酰亞胺標(biāo)準(zhǔn)品（MS6-MS1）。

3.工作溶液配制

3.1將10μL500X馬來(lái)酰亞胺Green 儲(chǔ)備溶液加入250μL反應(yīng)緩沖液（組分B）中并充分混合以制備20X馬來(lái)酰亞胺反應(yīng)混合物。在室溫下孵育20X馬來(lái)酰亞胺反應(yīng)混合物至少30分鐘，避光。注意：將20X馬來(lái)酰亞胺反應(yīng)混合物孵育至少30分鐘以使信號(hào)與背景比大化非常重要。注意：將500X馬來(lái)酰亞胺Green 儲(chǔ)備液加入反應(yīng)緩沖液（組分B）后，溶液呈黃色。

3.2將整瓶20X馬來(lái)酰亞胺反應(yīng)混合物加入5mL測(cè)定緩沖液（組分C）中并充分混合以制備馬來(lái)酰亞胺工作溶液。注意：此馬來(lái)酰亞胺工作溶液不穩(wěn)定，隨用隨配。