Amplite 比色法β-內酰胺酶活性檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產的用于β-內酰胺酶活性檢測的試劑盒，β-內酰胺酶是能夠水解β-內酰胺的大家族酶。β-內酰胺環是所有β-內酰胺中的常見成分，包括青*素衍生物，頭*菌素，單環內酰胺和碳青霉烯類。通過水解，β-內酰胺酶使β-內酰胺環打開，從而使分子的性能失活。臨床和非臨床環境中的通過合成β-內酰胺酶變得越來越對β-內酰胺產生抗性。為了克服這種抗性，β-內酰胺通常與β-內酰胺酶抑制劑如克拉維酸一起給予。因此，檢測β-內酰胺酶活性對于評估β-內酰胺以及預防抗性至關重要。AAT Bioquest的比色β-內酰胺酶活性測定試劑盒提供靈敏的比色測定，用于測量生物樣品中的β-內酰胺酶活性。使用Nitrocefin檢測β-內酰胺酶活性，其在β-內酰胺酶水解后由黃色變為紅色?？梢允褂梦舛让笜藘x通過測量波長490nm至380nm的OD比來進行測定。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優質的Amplite 比色法β-內酰胺酶活性檢測試劑盒。

96孔板實驗示例

概述

準備β-內酰胺酶測定混合物（50μL）

加入β-內酰胺酶標準品或測試樣品（50μL）

在室溫下孵育30-60分鐘

在OD比率為490 / 380nm時監測吸光度增加

注意：在開始實驗之前，在室溫下解凍每個試劑盒組分的一個小瓶。

操作方案

1.制備β-內酰胺酶標準儲備液：

將100μLddH2O加入到β-內酰胺酶標準品（組分C）的小瓶中以制備50mU /mLβ-內酰胺酶標準儲備溶液。

注意：未使用的β-內酰胺酶標準儲備液應分成一次性等分試樣并儲存在-20oC。

2.準備β-內酰胺酶標準品的連續稀釋液：

2.1將10μLβ-內酰胺酶標準儲備液（50 mU / mL，步驟1）加入990 L 1×PBS緩沖液中，生成500μU/mLβ-內酰胺酶標準溶液。

注意：稀釋的β-內酰胺酶標準溶液不穩定，應及時使用。

2.2取200μL500μU/mLβ-內酰胺酶標準溶液，在PBS中進行1：2連續稀釋，得到約250,125,62.5,31.3,15.6,7.8和0μU/ mL系列稀釋的β-內酰胺酶標準品。

2.3如說明書中的表1和2中所述，將含有β-內酰胺酶標準品和含β-內酰胺酶的測試樣品的系列稀釋液加入到96孔透明底部微量培養板中。

3.準備β-內酰胺酶測定混合物：

將50μL硝基呋喃儲備溶液（組分A）加入5mL組分B中，充分混合，制成β-內酰胺酶測定混合物（組分A + B）。

注意：這種β-內酰胺酶測定混合物足以用于一個96孔板。 β-內酰胺酶測定混合物不穩定，每次使用都要新鮮。

4.運行β-內酰胺酶測定：

4.1將50μLβ-內酰胺酶測定混合物（來自步驟3）添加到β-內酰胺酶標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中（參見步驟2.3），使總體積為100μL/孔。

注意：對于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μLβ-內酰胺酶測定混合物。

4.2在室溫下孵育反應30-60分鐘，避光。

4.3使用吸光度讀板儀檢測OD比為490/380 nm時的吸光度增加。