實驗樣品示例

概述

1.準(zhǔn)備細(xì)胞（0.5  -  1×106細(xì)胞/ mL）

2.將含有測試化合物和JJ1902 NAD（P）H探針的細(xì)胞在37℃孵育20-30分鐘

3.將細(xì)胞洗凈并保持在測定緩沖液中

4.使用APC通道用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞

注意：在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。

操作方法

1.對于每個樣品，將細(xì)胞制備在0.5 mL無血清培養(yǎng)基或您選擇的緩沖液中，密度為1×105至1×106個細(xì)胞/ mL。

注意1：應(yīng)對每個細(xì)胞系進(jìn)行單獨測評，以確定佳細(xì)胞密度。 對于貼壁細(xì)胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整，并用無血清培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次。

注意2：JJ1902 NAD（P）H探針在血清存在的情況下也兼容。

2.將細(xì)胞與測試化合物在37℃孵育所需的一段時間以刺激細(xì)胞內(nèi)NADH / NADPH。

注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r間取決于單個細(xì)胞類型和使用的測試化合物。 優(yōu)化每個實驗的孵育時間。

3.將1μL JJ1902NAD（P）H探針（組分A）加入0.5 mL細(xì)胞懸浮液中。在37℃下孵育30-60分鐘。

注意對于NADH / NADPH陽性對照處理：將Jurkat細(xì)胞與100μMNADH或NADPH在無血清培養(yǎng)基中孵育30分鐘，并與JJ1902 NAD（P）H探針工作溶液在37℃下共溫育30分鐘。 

4.用所需的緩沖液（如HHBS或DPBS）洗滌細(xì)胞一次。將細(xì)胞保存在分析緩沖液（組分B）中。

5.使用流式細(xì)胞儀監(jiān)測APC通道的熒光強(qiáng)度。