Amplite 比色法草酰乙酸檢測(cè)試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)草酰乙酸的試劑盒，草酰乙酸是檸檬酸循環(huán)的重要組成部分，它與乙酰*酶A反應(yīng)生成檸檬酸鹽。它還涉及糖異生，尿素循環(huán)，乙醛酸循環(huán)，氨基酸合成和脂肪酸合成。草酰乙酸的缺乏限制了糖原異生和尿素循環(huán)功能，并且可以導(dǎo)致能量產(chǎn)生減少。草酰乙酸也可用作血液谷*酸劑，在創(chuàng)傷性腦損傷后提供神經(jīng)保護(hù)，表現(xiàn)為海馬神經(jīng)元損失減少和神經(jīng)功能。Amplite 比色草酰乙酸檢測(cè)試劑盒提供了一種靈敏的檢測(cè)方法，用于定量生物樣品中的草酰乙酸。草酰乙酸轉(zhuǎn)化為丙酮酸，通過(guò)酶偶聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)生過(guò)氧化氫。用吸光度酶標(biāo)儀在575nm處用Amplite Red監(jiān)測(cè)過(guò)氧化氫的產(chǎn)生。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 比色法草酰乙酸檢測(cè)試劑盒。

96孔板測(cè)定示例

概述

準(zhǔn)備測(cè)試樣品（50μL）和連續(xù)稀釋的草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)品（50μL）

加入等體積的測(cè)定混合物（50μL）

在室溫下孵育30分鐘至1小時(shí)

監(jiān)測(cè)575nm處的吸光度強(qiáng)度

注意：在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。

操作方法

1.準(zhǔn)備連續(xù)稀釋的草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品：

1.1將100μLDdH2O加入到草酰乙酸鹽標(biāo)準(zhǔn)小瓶（組分E）中以制備100mM草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2制備草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)稀釋液：將10μL100mM草酰乙酸鹽（來(lái)自步驟1.1）加入990μL測(cè)定緩沖液（組分C）中，得到1mM草酰乙酸溶液。 將320μL的1mM草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液加入680μL測(cè)定緩沖液中以制備320μM草酰乙酸溶液。 進(jìn)行1：2連續(xù)稀釋?zhuān)玫?60,80,40,20,10,5μM連續(xù)稀釋的草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)品。

1.3根據(jù)說(shuō)明書(shū)中的表1，將50μL含草酰乙酸的樣品和連續(xù)稀釋的草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)品加入透明底96孔微量培養(yǎng)板中。

2.準(zhǔn)備草酰乙酸測(cè)定混合物：

2.1Make Amplite 紅色底物原液（200X）：將50μLDMSO（組分F）加入Amplite Red底物（組分A）中，制成200X Amplite Red底物原液。

2.2制備草酰乙酸脫羧酶（OAC）儲(chǔ)備溶液（100X）：將50μLddH2O加入草酰乙酸脫羧酶（組分D）中以制備100×草酰乙酸脫羧酶原液。

2.3制備測(cè)定混合物：將5mL測(cè)定緩沖液（組分C）加入一個(gè)酶混合瓶（組分B）中充分混合。 將50μLOAC儲(chǔ)備溶液（來(lái)自步驟2.2）和25μL200XAmplite Red儲(chǔ)備溶液（來(lái)自步驟2.1）轉(zhuǎn)移到瓶中并充分混合。

注意1：分析混合物不穩(wěn)定，及時(shí)使用，避免直接暴露在光線(xiàn)下。

注意2：將未使用的200X Amplite Red原液儲(chǔ)存在-20℃，避免光照和反復(fù)凍融循環(huán)。

3.運(yùn)行草酰乙酸測(cè)定：

3.1將50μL測(cè)定混合物（來(lái)自步驟2.3）添加到草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中（參見(jiàn)步驟1.3），以使總草酰乙酸測(cè)定體積為100μL/孔。

注意1：對(duì)于384孔板，每孔加入25μL樣品，25μLAssay混合液。

注意2：在pH 6.5至7.0下進(jìn)行草酰乙酸測(cè)定。

3.2在室溫下孵育反應(yīng)混合物30分鐘至1小時(shí)。

3.3使用575 nm的吸光度讀板儀檢測(cè)吸光度的增加。