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Amplite 比色法D-乳酸脫氫酶LDH檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測LDH的試劑he，乳酸脫氫酶（LDH ）是一種氧化還原酶，其催化丙酮酸和乳酸的相互轉(zhuǎn)換。 LDH存在于各種各樣的生物體，包括動物和植物的細(xì)胞質(zhì)中。細(xì)胞組織的損傷或紅細(xì)胞溶血后釋放的LDH進(jìn)入血液。因?yàn)長DH是相當(dāng)穩(wěn)定的酶，它已被廣泛地用于評價損傷組織和細(xì)胞毒性的存在。乳酸脫氫酶的定量具有廣闊的應(yīng)用范圍。 Amplite 乳酸脫氫酶測定試劑he提供用于生物樣品，如血清，血漿，以及細(xì)胞培養(yǎng)物的樣品中檢測到D-乳酸脫氫酶（D- LDH）基于熒光的方法。在酶偶聯(lián)法中 LDH與NADH是專門由NADH的熒光傳感器監(jiān)測比例濃度。這個實(shí)驗(yàn)是具體的D-乳酸脫氫酶。熒光信號可以通過熒光酶標(biāo)儀在575 nm處讀出。有了這個Amplite D-乳酸脫氫酶，我們能夠探測到低至 3 mU/mL的D-乳酸脫氫酶在100 μL的反應(yīng)體積。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的Amplite 比色法D-乳酸脫氫酶LDH檢測試劑盒。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1.準(zhǔn)備D-乳酸脫氫酶工作溶液（50 µL）
2.加入D-乳酸脫氫酶標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品（50 µL）
3.在室溫下孵育30分鐘-2小時
4.監(jiān)測在A575nm / A605nm處的吸光度比增加

溶液制備

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 NAD儲備溶液（100X）：
將100 µL H2O加入NAD小瓶（組分C）中，制成100X NAD儲備溶液。

1.2 D-LDH標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 U / mL）：
將100 µL H2O或1x PBS緩沖液加到D-LDH標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分D）的小瓶中，制成100 U / mL D-LDH標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

D-LDH標(biāo)準(zhǔn)
將10 µL 100X D-LDH標(biāo)準(zhǔn)溶液加到990 µL 1x PBS緩沖液中，以生成1000 mU / mL D-LDH標(biāo)準(zhǔn)溶液。取1000 mU / mL D-LDH標(biāo)準(zhǔn)溶液，并在PBS中進(jìn)行1：3的系列稀釋，以得到D-LDH標(biāo)準(zhǔn)品（SD7-SD1）的系列稀釋液。注意：稀釋的D-LDH標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時內(nèi)使用。

3.工作溶液

3.1 將10 mL測定緩沖液（組分B）添加到瓶中的酶探針（組分A）中，制成酶探針混合物。注意：此酶探針混合物足以容納兩個96孔板。它在室溫下不穩(wěn)定，應(yīng)在2小時內(nèi)及時使用，并避免暴露在光線下。或者，可以通過將200 µL H2O加入組分A的瓶子中制成50倍的D-LDH酶混合儲備液，然后通過將儲備液與測定緩沖液（組分B）混合并制備D-LDH工作溶液。按比例的100倍NAD解決方案。

3.2 將50 µL 100X NAD儲備溶液添加到5 mL酶探針混合物中，并充分混合以制成D-LDH工作溶液。注意：此D-LDH工作溶液足以用于一個96孔板。它不穩(wěn)定-足以進(jìn)行一個實(shí)驗(yàn)并立即使用。