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產品基本信息
產品名稱：Portelite 熒光法RNA定量試劑盒
英文名稱：Portelite™ Fluorimetric RNA Quantitation Kit*Optimized for Cytocite™ and Qubit™ Fluorometers*
產品貨號：17658 17659
產品規格：100 Tests 500 Tests
儲存條件：保存在冰箱-15℃干燥
保質期：12個月
檢測和定量少量 RNA 對于各種生物學應用極為重要，例如在進行 Northern 印跡分析、S1 核酸酶測定、RNase 保護測定、cDNA 文庫制備、逆轉錄之前測量體外轉錄 RNA 的產量和測量 RNA 濃度PCR、差異顯示PCR。測量核酸濃度常用的技術是測定 260 nm 處的吸光度。基于吸光度的方法受到蛋白質、游離核苷酸和其他紫外線吸收化合物引起的干擾的限制。使用敏感且選擇性的熒光核酸染色劑可以緩解這種干擾問題。 StrandBrite™ RNA 定量試劑是一種超靈敏熒光核酸染色劑，用于定量溶液中的 RNA。 StrandBrite™ RNA 定量試劑可使用 CytoCite™ 或 Qubit™ 熒光計檢測低至 5 ng/mL 的 RNA。我們的 StrandBrite™ Green 熒光 RNA 定量試劑盒包括我們的 StrandBrite™ Green 核酸染色劑和優化且穩定的實驗方案。它提供了一種定量溶液中 RNA 的便捷方法。
產品光譜圖
激發(納米)：509
發射(納米)：527
成分
成分A：StrandBrite 綠色 | 0.25 mL（在DMSO中為200X） |
成分B：測定緩沖液 | 1瓶（50ml） |
成分C：RNA標準＃1 | 1 mL（RNA：0 ng / µL） |
成分D：RNA標準＃2 | 4 X 250 µL（RNA：10 ng / µL） |
實驗方案
樣品分析方案
概述
準備 StrandBrite RNA 工作溶液
將 190 µL StrandBrite™ RNA 工作溶液添加到每個 0.2 mL PCR 管中
將 10 µL RNA 標準品或測試樣品添加到每個管中
室溫孵育2分鐘
使用 CytoCite™ 或 Qubit™ 熒光計檢測熒光
注：在開始實驗之前，將所有套件組件置于室溫下。
溶液配制
StrandBrite™ RNA 工作溶液
將 StrandBrite Green（組分 A）在測定緩沖液（組分 B）中稀釋 200 倍。例如，要為 8 個樣品準備足夠的工作溶液，請將 5 µL StrandBrite Green（組分 A）添加到 1 mL 測定緩沖液（組分 B）中。
注意 用箔紙覆蓋工作溶液或將其置于黑暗處，以避光。我們建議在塑料容器而不是玻璃容器中制備該溶液，因為染料可能會吸附到玻璃表面。為了獲得最佳效果，該溶液應在制備后幾小時內使用。
實驗方案
可接受的樣品體積范圍為 1~20 µL，具體取決于 RNA 樣品的估計濃度。推薦樣品體積為 10 µL，RNA 濃度在 0.01~10 ng/µL 范圍內。如果使用其他樣品體積，請調整濃度計算中的稀釋系數。
以下實驗方案是基于 10 µL 樣品體積、RNA 濃度在 0.01~10 ng/µL 范圍內生成的。
1.將 190 µL StrandBrite Green 工作溶液添加到每個 CytoCite 樣品管 (#CCT100) 或等效的 0.2 mL PCR 管中。 注意 使用薄壁聚丙烯透明 0.2 mL PCR 管，例如#CCT100。
2.將 10 µL RNA 標準品 #1 和 #2 或測試樣品添加到每個管中，然后通過渦旋 2~3 秒進行混合。
3.將所有管在室溫下孵育 2 分鐘。
4.將樣品插入 CytoCite™ 或 Quibit™ 并用綠色熒光通道檢測熒光。請遵循適用于 CytoCite™ 熒光計的程序。
標準校準曲線的制備（可選）
對于 StrandBrite™ 檢測，您可以選擇使用 RNA 標準品制作校準曲線。以下是生成定制 RNA 標準曲線的簡要方案：
1.使用 Assay Buffer 進行 1/3 系列稀釋，使用 RNA Standard #2 獲得 10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01 和 0 ng/μL RNA 標準稀釋液。
2.將 190 µL StrandBrite™ Green 工作溶液添加到每個管中。
3.將 10 µL RNA 標準品或測試樣品加入每個管中，然后渦旋 2~3 秒進行混合。
4.將反應物在室溫下孵育 2 分鐘。
5.將樣品插入 CytoCite™ 并用綠色熒光通道檢測熒光。
產品實驗圖
圖1。用 StrandBriteTM 綠色熒光 RNA 定量試劑盒生成 RNA 標準曲線。用綠色熒光通道定量熒光強度，用線性擬合法計算回歸模型。
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