細胞:ARPE-19細胞
中文名稱:人視網膜上皮細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:1640 培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
ARPE-19細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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核轉運過程中,另一類蛋白質具有GLFG氨基酸結構,如Importin α、Importin β、CRM1、CAS蛋白等均直接參與生物大分子的出入核轉運,統稱為親核素家族(Karyopherins),(通派細胞庫供應:Huvec細胞株)在這個家族中還有Kap123p、Pse1p和transportin等,目前已經發現上百個親核素家族成員。CRM1蛋白較為特殊,除具有保守的NES導向序列外,同時也是親核素家族中的一員。
每個家族成員都有各自相應的生物學功能,如Importin α與NLS蛋白相連;Importin β與Importin α相連;CAS蛋白作為Importin α連接子,(通派細胞庫供應:CNE-2細胞株)參與Importin α返回細胞質;Kap123p和 Pse1p參與mRNA出核RNP蛋白的再入核過程;
CRM1結合mRNA和Rev并促進mRNA的出核。近年發現轉運子(transportin)能識別M9信號肽,(通派細胞庫供應:Sw1990細胞株)兼有識別經典核轉運途徑中NLS結構和參與Importin β轉運導向的雙重作用。
生物大分子細胞核轉運過程具有重要的醫藥學研究價值。在血管緊張素II刺激大腦神經細胞反應中細胞內信號分子轉錄調節因子Stat3,(通派細胞庫供應:MEF細胞株)首先須進行入核轉運,這一過程已經闡明,這對于深入了解高血壓時神經細胞的作用機制奠定了基礎;
在惡性骨髓瘤遺傳性染色體顛倒異位研究中發現核孔素NPU98基因與RNA解旋酶基因之間出現融合現象;(通派細胞庫供應:SP2/O細胞株)同時入核轉運過程的研究為核靶向轉運新藥的設計提供了新的思路。綜上說明,細胞核質轉運過程及機制的研究具有重要的醫藥學價值。